Il-volum tal-blokki tal-kampjun tat-tessut
Fuq mikroskopji mgħammra b'lenti ta 'kondensatur, tista' tmexxi l-kondensatur 'il fuq u 'l isfel biex taġġusta l-luminożità għal livell xieraq. Barra minn hekk, tista 'tbiddel l-apertura tad-dijaframma tal-iris biex tikseb luminożità xierqa. Jekk id-dawl ikun baxx wisq, għolli l-kondensatur b'mod xieraq u tiftaħ l-apertura tad-dijaframma tal-iris usa'. Jekk id-dawl ikun qawwi wisq, baxxi l-kondensatur kif xieraq u naqqas l-apertura tad-dijaframma tal-iris. Jekk id-dawl ikun għadu jgħajjat wara dawn l-aġġustamenti, poġġi filtru addattat fuq il-holder taħt il-kondensatur biex tikseb illuminazzjoni sodisfaċenti. Naturalment, il-profiċjenza fl-aġġustament tal-pożizzjoni vertikali tal-kondensatur, ir-regolazzjoni tal-apertura tad-dijaframma tal-iris, u l-għażla ta 'filtri xierqa teħtieġ esperjenza prattika akkumulata maż-żmien.
Aspett kritiku ieħor tal-mikroskopija bijoloġika jinsab fil-proċeduri tat-teħid ta 'kampjuni tal-materjal u l-iżolament taċ-ċelluli. Wara t-tnixxif bil-friża (FD), l-inkorporazzjoni tar-reżina, u t-taqsima ultrathin iffriżata, għandha tingħata attenzjoni kbira biex tiġi ppreservata l-kompożizzjoni elementali tal-komponenti ċellulari kollha mingħajr ma ssir ħsara liċ-ċelloli maħsuba għall-osservazzjoni u l-analiżi. Mikroanaliżi tar-raġġi X tinvolvi proċeduri kumplessi u spejjeż għoljin. Ikun ta' dispjaċir li jinġibdu konklużjonijiet żbaljati jekk iċ-ċelluli eżaminati wara preparazzjoni fit-tul u f'diversi stadji huma mħassra jew mhux vijabbli.Pereżempju, kardjomijoċiti iżolati permezz tad-diġestjoni tal-collagenase jippreżentaw żewġ forom morfoloġiċi: ċelluli forma ta' virga tawwalija u ċelluli tondi. Dawk tondi huma ċelluli bil-ħsara li jmutu midruba waqt l-iżolament taċ-ċelluli.
Il-kontenut u d-distribuzzjoni tal-elettroliti jvarjaw b'mod sinifikanti bejn dawn iż-żewġ tipi ta 'ċelluli. Il-kardjomijoċiti tondi fihom livelli ta 'sodju estremament għoljin u livelli ta' potassju baxxi ħafna, flimkien ma 'konċentrazzjoni ta' kalċju għolja ħafna fil-mitokondrija. Il-verifika inkroċjata ma 'metodi analitiċi oħra tikkonferma li s-sodju għoli, il-potassju baxx u l-kalċju mitokondrijali għoli fiċ-ċelloli tondi jirriżultaw minn ħsara lill-membrana taċ-ċellula waqt l-iżolament.
Il-krijofissazzjoni taċ-ċelluli u t-tessuti normalment tibda b'iffriżar bil-plunge, segwit minn ħażna fin-nitroġenu likwidu. L-iffriżar bil-plunge huwa kruċjali għall-kwalità tal-preservazzjoni. Iċ-ċelloli ħajjin u t-tessuti friski fihom ilma abbundanti. Waqt l-iffriżar bil-passaġġ, il-partijiet taċ-ċelloli jew tat-tessuti li jiġu f'kuntatt dirett mal-krijoġenu (speċjalment in-nitroġenu likwidu) jiffriżaw u jiffissaw l-ewwel, u jiffurmaw qoxra ffriżata li tfixkel l-iffriżar rapidu u l-iffissar tar-reġjun ċentrali tal-kampjun. Konsegwentement, il-kristalli tas-silġ huma osservati ta 'spiss fiż-żona ċentrali ta' ċelloli akbar waqt il-mikroanaliżi tar-raġġi X.
Biex tiġi evitata din il-problema, huma adottati krijoġeni b'punt ta 'tidwib ogħla min-nitroġenu likwidu iżda inqas minn -80 grad. Fost diversi għażliet disponibbli, il-propan likwidu huwa faċli biex jinkiseb, bi prezz baxx, u joffri rata ta 'tkessiħ estremament mgħaġġla (punt tat-togħlija: -42.12 grad; punt tat-tidwib: -187.1 grad; piż molekulari: 44.1). L-uniku żvantaġġ tiegħu huwa l-fjammabbiltà.
