Proċedura Standard għall-Ikalibrar tal-Polarizzaturi f'Mikroskopju Polarizzanti
Il-mikroskopju tal-fluworexxenza huwa differenti mill-mikroskopju ottiku ordinarju peress li ma josservax kampjuni taħt l-illuminazzjoni ta 'sorsi tad-dawl ordinarji. Minflok, juża ċertu wavelength ta 'dawl (ġeneralment dawl ultravjola, dawl blu vjola) biex teċita s-sustanzi fluworexxenti ġewwa l-kampjun taħt il-mikroskopju, u jġiegħelhom jarmu fluworexxenza. Għalhekk, ir-rwol tas-sors tad-dawl fil-mikroskopju fluworexxenti mhuwiex illuminazzjoni diretta, iżda bħala sors ta 'enerġija biex iħeġġeġ is-sustanzi fluworexxenti ġewwa l-kampjun. Ir-raġuni għaliex nistgħu nosservaw kampjuni mhix dovuta għall-illuminazzjoni tas-sors tad-dawl, iżda l-fenomenu fluworexxenti esibiti mis-sustanzi fluworexxenti ġewwa l-kampjun wara li jassorbu l-enerġija tad-dawl eċċitati. Minn dan, wieħed jista 'jara li l-karatteristika tal-mikroskopija fluworexxenti hija prinċipalment li s-sors tad-dawl tiegħu jista' jforni ammont kbir ta 'dawl ta' eċċitazzjoni f'firxa speċifika ta 'wavelength, sabiex is-sustanzi fluworexxenti fil-kampjun jistgħu jiksbu l-intensità meħtieġa ta' dawl ta 'eċitazzjoni. Fl-istess ħin, mikroskopji fluworexxenti għandu jkollhom sistemi ta 'filtri korrispondenti. Il-mikroskopju tal-fluworexxenza huwa għodda fundamentali fil-kimika tat-tessuti tal-fluworexxenza. Huwa magħmul minn komponenti ewlenin bħal sors ta 'dawl ta' vultaġġ ultra-għoli, sistema ta 'filtru (inklużi pjanċi tal-filtri ta' eċċitazzjoni u soppressjoni), sistema ottika, u sistema ta 'fotografija. Juża dawl ta 'ċertu wavelength biex teċita l-kampjun u temetti fluworexxenza.
1. Metodi ta 'eċitazzjoni tal-fluworexxenza: Skont il-firxa tal-wavelength tad-dawl, hemm żewġ tipi: metodu ta' eċċitazzjoni UV (bl-użu ta 'illuminazzjoni ultravjola) u metodu ta' eċċitazzjoni BV (bl-użu ta 'dawl vjola blu). Il-metodu ta 'eċitazzjoni UV juża ħdejn dawl ultravjola iqsar minn 400nm għall-eċitazzjoni. Dan il-metodu m'għandux dawl ta 'eċitazzjoni viżibbli, għalhekk il-fluworexxenza osservata turi l-fluworexxenza inerenti taż-żebgħa, li jagħmilha faċli li tiddistingwi l-fluworexxenza speċifika fuq il-kampjun mill-fluworexxenza awto tat-tessut tal-isfond.
2. Metodu ta 'eċitazzjoni BV: Jinvolvi eċċitazzjoni minn dawl ultravjola għal dawl blu ċċentrata f'404nm u 434nm. Dan il-metodu juża dawl blu biex irradja l-kampjun, għalhekk il-filtru cut-off tas-sistema ta 'osservazzjoni tal-fluworexxenza għandu juża filtru li jista' jimblokka kompletament id-dawl blu u jgħaddi bis-sħiħ mill-fluworexxenza ħadra u isfar meħtieġa. Pigmenti fluworexxenti użati għall-metodu ta 'antikorpi fluworexxenti. Il-wavelength ta 'assorbiment massimu tad-dawl ta' eċċitazzjoni u l-wavelength massimu ta 'emissjoni ta' fluworexxenza huma relattivament qrib, għalhekk il-filtru użat fil-metodu ta 'eċitazzjoni BV għandu juża filtru maqtugħ li jaqta'. Dan il-metodu jista 'juża dawl blu bħala dawl ta' eċċitazzjoni, għalhekk l-effiċjenza ta 'assorbiment ta' pigmenti fluworexxenti hija għolja, u jistgħu jinkisbu stampi isbaħ. L-iżvantaġġ huwa li l-fluworexxenza taħt il-500nm ma tistax tidher, filwaqt li l-fluworexxenza 'l fuq minn 500nm tagħmel l-immaġni kollha tidher isfar. Fil-metodu tal-antikorpi fluworexxenti, l-ispeċifiċità hija l-aktar iddeterminata mill-kulur uniku għal pigmenti fluworexxenti, għalhekk meta tiddiskuti l-ispeċifiċità sottili, l-iżvantaġġi tal-metodu ta 'eċċitazzjoni BV imsemmi hawn fuq spiss ikollhom impatt sinifikanti.
