Tekniki ta 'tbajja' u osservazzjoni mikroskopika ta' mikro-organiżmi
1. Għan
1.1 Tgħallem it-tekniki bażiċi ta 'smears u tbajja' mikrobiċi.
1.2 Ikkontrolla l-metodu ta 'tbajja' sempliċi tal-batterji.
1.3 Preliminarjament tifhem il-karatteristiċi morfoloġiċi tal-batterja, u tikkonsolida l-għarfien dwar kif tuża lentijiet taż-żejt u tekniki ta 'tħaddim asettiku.
2 Prinċipji
It-tbajja 'u t-tbajja' tal-batterja hija teknika bażika fl-esperimenti tal-mikrobijoloġija. Iċ-ċelloli tal-batterja huma żgħar u trasparenti, li jagħmluhom diffiċli biex jiġu identifikati taħt mikroskopju tad-dawl ordinarju; għandhom ikunu mtebbgħin. Żebgħa waħda tintuża biex iż-żebgħa tal-batterji, sabiex il-batterji mtebbgħin jiffurmaw differenza ċara tal-kulur mill-isfond, sabiex il-morfoloġija u l-istruttura tagħhom ikunu jistgħu jiġu osservati b'mod aktar ċar. Dan il-metodu huwa faċli biex topera u adattat għall-osservazzjoni tal-forma ġenerali taċ-ċelloli tal-batterja u l-arranġament tal-batterji. Iż-żebgħat bażiċi huma komunement użati għal tbajja sempliċi. Dan għaliex f'soluzzjonijiet newtrali, alkalini jew aċidużi dgħajjef, iċ-ċelluli batteriċi huma ġeneralment iċċarġjati b'mod negattiv, u meta ż-żebgħat bażiċi huma jonizzati, il-parti taż-żebgħa tal-molekuli tagħhom hija ċċarġjata b'mod pożittiv, għalhekk huma alkalini. Il-parti tat-tebgħa taż-żebgħa faċilment tgħaqqad mal-batterji biex tagħtihom il-kulur. Iċ-ċelloli batteriċi mtebbgħin jikkuntrastaw sew mal-isfond, u jagħmluhom aktar faċli biex jiġu identifikati taħt mikroskopju. Iż-żebgħat użati komunement għal żebgħa sempliċi jinkludu blu tal-metilen, vjola tal-kristall, fuchsin bażiku, eċċ Meta l-batterji jiddekomponu z-zokkor u jipproduċu aċidu, u jikkawża li l-pH tal-medju tal-kultura jinżel, il-ħlas pożittiv fuq il-batterja tiżdied. F'dan iż-żmien, żebgħa aċiduża bħal eosin, fuchsin aċidu, jew aħmar tal-Kongo jistgħu jintużaw għat-tbajja '. Il-batterji għandhom jiġu ffissati qabel it-tbajja '. Għandu żewġ skopijiet: wieħed huwa li joqtol il-batterja u jagħmilhom jaderixxu mal-pjastra tal-ħġieġ; l-ieħor huwa li tiżdied l-affinità tagħhom għaż-żebgħa. Żewġ metodi komunement użati huma t-tisħin u l-iffissar kimiku. Meta tiffissa, ipprova żomm il-forma oriġinali taċ-ċelloli.
3 materjali
3.1 Batterji: Bacillus subtilis 12-18h nutrient agar slant culture, Staphylococcus aureus 24h nutrient agar slant culture, Escherichia coli 24h nutrient agar slant culture, ħmira tal-furnar agar slant.
3.2 Aġent taż-żebgħa: Żebgħa blu tal-metilen alkalin ta 'Lu's (jew żebgħa vjola tal-kristall tal-ammonju ossalate), żebgħa tal-fuchsin tal-aċidu karboliku.
3.3 Strumenti jew utensili oħra: mikroskopju, fanal ta 'l-alkoħol, slide, loop ta' inokulazzjoni, rack slide, flixkun b'saff doppju (li jkun fih żejt taċ-ċedru u xylene), tessut tal-lenti, salin fiżjoloġiku jew ilma distillat, eċċ.
4. Proċess: smear → tnixxif → iffissar → tbajja → ħasil → tnixxif → eżami mikroskopiku.
5 passi
5.1 Smear: Ħu żewġ slides tal-ħġieġ nodfa u mingħajr żejt. Taħt kundizzjonijiet sterili, poġġi qatra żgħira ta 'melħ normali (jew ilma distillat) fuq kull ċentru tal-pjastra tal-ħġieġ. Uża linja ta' inokulazzjoni biex sterilizza l-batterja minn Bacillus subtilis. , Micrococcus luteus u Escherichia coli, aqbad ftit lawn batterjali fil-qtar ta 'l-ilma fuq l-inklinazzjoni, ħallat sew u applikaha f'film irqiq. Jekk tuża smear ta 'sospensjoni batterika (jew kultura likwida), tista' tuża linja tat-tilqim biex tagħżel 2 sa 3 linji u tapplikahom direttament fuq il-pjastra. Oqgħod attent li ma taqax wisq salina fiżjoloġika (ilma distillat) u neħħi l-batterja u applikaha b'mod uniformi u mhux ħoxna wisq.
5.2 Tnixxif Nixxef b'mod naturali f'temperatura ambjentali. Tista 'wkoll issaħħanha ftit fuq lampa ta' l-alkoħol bin-naħa miksija tħares 'il fuq biex tinxef. Imma kun żgur li ma tersaqx wisq qrib il-fjamma, peress li temperatura għolja wisq teqred il-morfoloġija tal-batterja.
5.3 Twaqqif Jekk jintuża t-tnixxif imsaħħan, l-iffissar u t-tnixxif huma kkombinati fi stadju wieħed, u l-metodu huwa l-istess bħat-tnixxif. Smear, nixxef u waħħal is-sħana.
5.4 Tbajja: Poġġi l-pjastra ċatta fuq ix-xtilliera tal-pjastra, u żid 1 sa 2 qatriet ta 'soluzzjoni taż-żebgħa fuq it-tiċrit (huwa xieraq li s-soluzzjoni taż-żebgħa tkopri biss il-film tal-ismear). Tebgħa bil-blu tal-metilen bażiku ta 'Lu għal 1 sa 2 minuti, u tebgħa bl-aċidu karboliku fuchsin (jew ammonju ossalat vjola kristall) għal madwar minuta.
5.5 Ħasil bl-ilma: Ferra’ s-soluzzjoni taż-żebgħa u laħlaħ bil-mod bl-ilma tal-vit minn tarf wieħed tal-pjastra sakemm l-ilma jinżel mit-tiċrit ikun bla kulur. Meta taħsel bl-ilma, aħsilx il-wiċċ miksi direttament bl-ilma. Il-fluss ta 'l-ilma m'għandux ikun mgħaġġel wisq jew kbir wisq biex jipprevjeni li l-film smear ma jaqax.
5.6 Tnixxif: Ħawwad il-qtar tal-ilma fuq il-pjastra u nixxef b'mod naturali, nixxef b'hair dryer jew assorbiha b'karta assorbenti (oqgħod attent li ma timsaħx il-batterja). 5.7 Eżami mikroskopiku Wara li t-tiċrit ikun niexef, wettaq eżami mikroskopiku. It-tiċrit għandu jkun kompletament niexef qabel ma jaraha b'lenti taż-żejt.
6 Riżultati Pinġi l-morfoloġija ta' E. coli u Micrococcus luteus osservati wara tbajja waħda.
