Tekniki ta 'tbajja' u osservazzjoni mikroskopika ta' mikro-organiżmi
Tbajja Sempliċi ta' Batterji
1 Għanijiet
1.1 Li titgħallem it-tekniki bażiċi ta 'smear u tbajja' mikrobiċi.
1.2 Biex tikkontrolla l-metodu ta 'tbajja sempliċi tal-batterji.
1.3 Biex issir taf il-karatteristiċi morfoloġiċi tal-batterja, u biex tikkonsolida t-tagħlim tal-użu tal-mera taż-żejt u tekniki ta 'tħaddim asettiku.
2 Prinċipju It-tiċrit u t-tbajja' tal-batterja hija teknika bażika fl-esperimenti tal-mikrobijoloġija. Iċ-ċelloli tal-batterji huma żgħar u trasparenti, mhumiex faċli biex jiġu rikonoxxuti taħt il-mikroskopju tad-dawl ordinarju, u għandhom ikunu mtebba. L-użu ta 'żebgħa waħda biex tebgħa l-batterja, sabiex l-organiżmu mtebba' u l-isfond jiffurmaw differenza ċara tal-kulur, sabiex il-morfoloġija u l-istruttura tagħhom ikunu jistgħu jiġu osservati b'mod aktar ċar. Dan il-metodu huwa faċli biex jitwettaq u huwa adattat għall-osservazzjoni tal-forma ġenerali tal-organiżmu u l-arranġament tal-batterja. Iż-żebgħat alkalini huma komunement użati għal tbajja sempliċi, minħabba li f'soluzzjonijiet newtrali, alkalini jew aċidużi dgħajjef, iċ-ċelluli batteriċi huma ġeneralment iċċarġjati b'mod negattiv, u meta ż-żebgħa alkalina huma jonizzati, il-porzjon tat-tbajja 'tal-molekuli tagħhom huwa ċċarġjat b'mod pożittiv, għalhekk il-porzjon tat-tbajja ta' żebgħa alkalina jistgħu faċilment jorbtu mal-batterji biex jagħmlu l-batterja kkulurita. Iċ-ċelloli batteriċi mtebbgħin jikkuntrastaw sew mal-isfond u huma aktar faċli biex jiġu rikonoxxuti taħt il-mikroskopju. Iż-żebgħat użati b'mod komuni għal tbajja sempliċi jinkludu merocyanine blu, vjola kristall u aħmar kompost bażiku. Meta d-dekompożizzjoni batterjali taz-zokkor biex tipproduċi aċidu sabiex il-pH tal-medju jonqos, il-ħlas pożittiv tal-batterja tiżdied, u mbagħad jista 'jintuża f'kulur aħmar, aħmar aċiduż jew aħmar tal-Kongo u żebgħa aċiduża oħra. Il-batterji għandhom jiġu ffissati qabel it-tebgħa. L-iskop tiegħu huwa doppju: wieħed huwa li joqtol il-batterji u jagħmel il-batterji jaderixxu mal-pjastra; it-tieni huwa li żżid l-affinità tagħha għaż-żebgħa. Żewġ metodi huma komunement użati: tisħin u fissazzjoni kimika. Ipprova żomm il-morfoloġija oriġinali taċ-ċelloli meta twaħħal.
3 Materjali
3.1 Razza Bacillus subtilis 12-18h nutrient agar slant culture, Staphylococcus aureus madwar 24h nutrient agar slant culture, Escherichia coli 24h nutrient agar slant culture, ħmira tal-furnar agar slant.
3.2 Tebgħa Tebgħa blu tal-metilen alkalin ta 'Lue (jew tebgħa vjola tal-kristall ta' l-ammonju ossalate), tebgħa ħamra kompost ta 'aċidu karboliku.
3.3 Strumenti jew parafernali oħra Mikroskopju, fanal ta 'l-alkoħol, slide, ċirku ta' tilqim, detentur ta 'slajds, flixkun b'saffi doppji (mimli b'żejt taċ-ċedru u xylene), karta mikroskopika, salina fiżjoloġika jew ilma distillat, eċċ.
4 Proċedura Smear → tnixxif → iffissar → tbajja → ħasil → tnixxif → eżami mikroskopiku.
5 Passi
5.1 smear Ħu żewġ slides nodfa u mingħajr żejt, kull wieħed bi qatra żgħira ta 'melħ (jew ilma distillat) fiċ-ċentru tal-pjastra taħt kundizzjonijiet asettiċi, b'ċirku ta' inokulazzjoni biex topera b'mod asettiku, rispettivament, mill-Bacillus subtilis, Garcinia micrococcus u Escherichia coli slant li pick ħażiż ftit fil-qatra ta 'ilma, taħlit u miksija b'film. Jekk is-sospensjoni batterika (jew il-kultura likwida) smear, tista 'tintuża biex titlaqqam iċ-ċirku pick 2 sa 3 ċrieki direttament fuq il-pjastra. Innota li s-salina (ilma distillat) u tieħu l-batterja m'għandhiex tkun wisq u tinfirex b'mod uniformi, mhux ħoxna wisq.
5.2 Tnixxif Nixxef b'mod naturali f'temperatura ambjentali. Jista' wkoll jitnixxef billi jissaħħan ftit 'il fuq minn lampa tal-alkoħol bin-naħa miksija 'l fuq. Madankollu, tersaqx wisq qrib il-fjamma, minħabba li t-temperatura hija għolja wisq teqred il-morfoloġija tal-batterja.
5.3 Twaħħil Jekk jintuża t-tnixxif bis-sħana, l-iffissar u t-tnixxif huma magħquda fi stadju wieħed bl-istess mod bħat-tnixxif. Smear, nixxef u waħħal is-sħana.
5.4 Tbajja Poġġi l-pjastra ċatta fuq l-ixkaffa slide, żid 1 sa 2 qatriet ta 'soluzzjoni tat-tbajja' fuq it-tiċrit (is-soluzzjoni tat-tbajja 'tkopri biss il-film smear hija xierqa). Tebgħa t-tebba b'Lü's Basic Mellanox Blue għal 1 ~ 2min, u b'Carbonate Red (jew Ammonium Oxalate Crystal Violet) għal madwar 1min.
5.5 Tlaħliħ Ferra' s-soluzzjoni tat-tbajja' u laħlaħ bil-mod bl-ilma tal-vit minn tarf wieħed tal-pjastra sakemm l-ilma jinżel mit-tiċrit ikun bla kulur. Meta tlaħlaħ, tħallix l-ilma jiċċirkola direttament biex taħsel il-wiċċ miksi. Il-fluss ta 'l-ilma m'għandux ikun mgħaġġel wisq jew kbir wisq biex tevita li tneħħi l-film smear.
5.6 Tnixxif Ħawwad il-qtar ta 'l-ilma fuq il-pjastra biex jinxef b'mod naturali, tista' tintuża karta niexfa jew assorbenti biex tassorbi niexfa (oqgħod attent li ma timsaħx il-korp batterjali). 5.7 Eżami mikroskopiku It-tiċrit huwa mnixxef u eżaminat bil-mikroskopija. It-tiċpa trid tkun niexfa għal kollox qabel ma tkun tista' tiġi osservata b'mikroskopju taż-żejt.
6 Riżultati Iġbed il-morfoloġija ta 'E. coli u Micrococcus garciniae wara tbajja' waħda.
Tebgħa Gram
1 Għan
1.1 Biex tifhem il-prinċipju tat-tebgħa Gram u l-importanza tagħha fil-klassifikazzjoni u l-identifikazzjoni tal-batterji.
1.2 Li titgħallem u tikkontrolla t-teknika tat-tbajja Gram u tikkonsolida t-tagħlim tal-użu tal-lenti taż-żejt tal-mikroskopju tad-dawl.
