Prinċipji tal-Laser Confocal Microscopy (LSCM)
Mikroskopju konfokali tal-lejżer juża pinhole tal-illuminazzjoni mqiegħda wara s-sors tad-dawl u pinhole ta 'skoperta mqiegħda quddiem id-ditekter biex tinkiseb illuminazzjoni tal-punt u skoperta tal-punt. Id-dawl mis-sors tad-dawl huwa ffokat fuq punt fil-pjan fokali tal-kampjun mid-dawl mitfugħ mill-pinhole tal-illuminazzjoni, u l-fluworexxenza emessa minn dak il-punt hija immaġni fi ħdan il-pinhole ta 'skoperta, u kwalunkwe dawl emess barra minn dak il-punt huwa mblukkat mill- skoperta pinhole. Il-pinhole ta 'l-illuminazzjoni u l-pinhole ta' skoperta huma konjugati għall-punt illuminat jew skopert, sabiex il-punt misjub ikun il-punt konfokali u l-pjan fejn jinsab il-punt skopert huwa l-pjan konfokali. Il-kompjuter juri l-punt misjub fuq l-iskrin tal-kompjuter fil-forma ta 'punt ta' immaġni. Sabiex tipproduċi immaġni kompluta, sistema ta 'skanjar fil-mogħdija ottika tiskennja fuq il-pjan fokali tal-kampjun, u b'hekk tipproduċi immaġni konfokali kompleta. Sakemm l-istadju tal-ġarr jitmexxa 'l fuq u' l isfel tul l-assi Z, livell ġdid tal-kampjun jiġi mċaqlaq lejn il-pjan konfokali, u l-livell il-ġdid tal-kampjun jiġi immaġni fuq il-monitor, hekk kif l-assi Z ikompli jiċċaqlaq, jinkisbu immaġini suċċessivi maqtugħin tad-dawl ta 'livelli differenti tal-kampjun.
Il-mikroskopju ottiku tradizzjonali juża sors tad-dawl tal-kamp, l-immaġni ta 'kull punt fuq il-kampjun se tkun interferita bid-diffrazzjoni jew it-tifrix tad-dawl mill-punti ġirien; mikroskopju konfokali tal-iskannjar tal-lejżer juża raġġ tal-lejżer mill-pinhole illuminat biex jifforma sors ta 'dawl punt fuq il-kampjun skannjat f'kull punt tal-pjan fokali intern, il-kampjun fuq il-punt irradjat, l-immaġini tal-pinhole ta' skoperta, mill-iskoperta ta 'pinhole wara l-punt tat-tubu tal-multiplikazzjoni tad-dawl (PMT) jew apparat elettrokkoppjat kiesaħ (cCCD) Riċevut punt b'punt jew linja b'linja, immaġni fluworexxenti hija ffurmata malajr fuq l-iskrin tal-monitor tal-kompjuter. Pinhole ta 'l-illuminazzjoni u pinhole ta' sejbien relattiv għall-pjan fokali tal-lenti oġġettiva huwa konjugat, il-punt fuq il-pjan fokali fl-istess ħin iffokat fuq il-pinhole ta 'l-illuminazzjoni u l-pinhole ta' emissjoni, il-punt barra l-pjan fokali mhux se jkun fl-iskoperta tal- pinhole fl-immaġini, sabiex l-immaġni confocal miksuba hija cross-section ottika tal-kampjun, jegħlbu n-nuqqasijiet ta 'l-immaġni mikroskopju ordinarju fuzzy.
Mill-prinċipju bażiku, mikroskopju konfokali tal-laser huwa mikroskopju ottiku modern, huwa l-mikroskopju tad-dawl ordinarju mit-teknoloġija biex jagħmel it-titjib li ġej.
1. Uża l-laser bħala s-sors tad-dawl minħabba li l-monokromatika tal-lejżer hija tajba ħafna, il-wavelength tar-raġġ tas-sors tad-dawl huwa l-istess, u b'mod fundamentali telimina l-aberrazzjoni kromatika.
2. L-użu ta 'teknoloġija konfokali fil-pjan fokali tal-lenti oġġettiva mqiegħda fin-nofs b'toqba żgħira fil-baffle, il-pjan fokali barra l-imblukkar tad-dawl mitluf, jelimina l-aberrazzjoni sferika; u tkompli telimina l-aberrazzjoni kromatika.
3. Mikroskopju konfokali tal-lejżer bl-użu tat-teknoloġija tal-iskanjar tal-punt biex jiddekomponi l-kampjun fi spazju bidimensjonali jew tridimensjonali f'punti bla għadd, b'raġġ tal-lejżer żgħir ħafna (sors tad-dawl tal-punt) punt b'punt, linja b'linja tal-iskannjar tal-immaġni, u mbagħad permezz il-kombinazzjoni tal-mikrokompjuter ta 'pjan sħiħ jew immaġni tridimensjonali. Il-mikroskopju tad-dawl tradizzjonali huwa sors tad-dawl tal-kamp taħt l-immaġini ta 'darba, kampjuni fuq kull punt tal-immaġni se jkunu ħdejn il-punt tad-dawl diffratted u interferenza tad-dawl imxerred. Iċ-ċarezza u l-preċiżjoni ta 'dawn iż-żewġ stampi ma jistgħux jitqabblu.
4. Akkwist u pproċessar ta' sinjali ottiċi b'kompjuter u amplifikazzjoni tas-sinjali b'tubu fotomultiplikatur
Fil-mikroskopju konfokali tal-lejżer, il-kompjuter jissostitwixxi l-għajn tal-bniedem jew il-kamera għall-osservazzjoni u r-reġistrazzjoni tal-vidjo, u l-immaġini miksuba huma diġitizzati u jistgħu jiġu pproċessati fil-kompjuter biex jerġgħu jtejbu ċ-ċarezza tal-immaġini. Barra minn hekk, l-użu ta 'tubi fotomultiplikaturi jista' jamplifika sinjali dgħajfa ħafna, u jtejjeb ħafna s-sensittività. Bħala riżultat tal-użu kombinat tat-teknoloġiji ta 'hawn fuq, jista' jingħad li l-LSCM huwa l-aktar mikroskopju avvanzat fid-dinja. Jista 'jingħad li LSCM hija l-kombinazzjoni tat-teknoloġija tal-produzzjoni tal-mikroskopju, teknoloġija fotoelettrika, teknoloġija tal-kompjuter **, hija l-prodott inevitabbli tal-iżvilupp tat-teknoloġija moderna.
