Prinċipju u Kostruzzjoni tal-Mikroskopju Fluworexxenti
Mikroskopju tal-fluworexxenza juża sors ta 'dawl ta' punt ta 'effiċjenza luminuża għolja, li jarmi ċertu wavelength ta' dawl (bħal dawl ultravjola 3650 pulzieri jew dawl blu vjola 4200 pulzieri) permezz ta 'sistema ta' filtrazzjoni tal-kulur bħala dawl ta 'eċitazzjoni, u eċċita s-sustanzi fluworexxenti fil-kampjun biex jarmu diversi kuluri ta 'fluworexxenza. Wara dan, jiġi osservat permezz ta 'ingrandiment tal-objettiv u l-ocular. B'dan il-mod, anke bi fluworexxenza dgħajfa, huwa faċilment rikonoxxibbli u sensittiv ħafna taħt sfondi kontrastanti qawwija, prinċipalment użati għall-istudju tal-istruttura u l-funzjoni taċ-ċelluli, kif ukoll il-kompożizzjoni kimika. L-istruttura bażika ta 'mikroskopju fluworexxenti hija komposta minn mikroskopju ottiku ordinarju u xi aċċessorji (bħal sors tad-dawl fluworexxenti, filtru ta' eċċitazzjoni, separatur tar-raġġ bikromatiku, u filtru li jimblokka, eċċ.). Sorsi ta 'dawl fluworexxenti - normalment jużaw lampi tal-merkurju ta' pressjoni ultra-għolja (50-200W), li jistgħu jarmu dawl ta 'tul ta' mewġ differenti. Madankollu, kull sustanza fluworexxenti għandha wavelength tad-dawl ta 'eċitazzjoni li tipproduċi l-aktar fluworexxenza qawwija, għalhekk filtri ta' eċċitazzjoni (ġeneralment filtri ta 'eċitazzjoni ultravjola, vjola, blu, u aħdar) jeħtieġ li jiżdiedu biex jippermettu biss ċertu wavelength ta' dawl ta 'eċitazzjoni li jgħaddi u jdawwal. il-kampjun, filwaqt li jassorbi d-dawl l-ieħor kollu. Wara li tkun irradjata minn dawl eċċitati, kull sustanza temetti fluworexxenza viżibbli b'wavelength itwal mill-irradjazzjoni f'perjodu qasir ħafna ta 'żmien. Il-fluworexxenza għandha speċifiċità u ġeneralment hija aktar dgħajfa mid-dawl ta 'eċitazzjoni. Sabiex tosserva fluworexxenza speċifika, jeħtieġ li jiżdied filtru li jimblokka (jew li jrażżan) wara l-lenti oġġettiva. Għandu żewġ funzjonijiet: l-ewwelnett, jassorbi u jimblokka d-dawl ta 'eċitazzjoni milli jidħol fl-ocular biex tevita li tfixkel il-fluworexxenza u tagħmel ħsara lill-għajnejn; it-tieni, tagħżel u tippermetti fluworexxenza speċifika li tgħaddi, turi kulur ta 'fluworexxenza speċifiku. Iż-żewġ tipi ta 'filtri għandhom jintgħażlu għall-użu flimkien.
Hemm żewġ tipi ta 'mikroskopji fluworexxenti bbażati fuq il-mogħdija ottika tagħhom:
1. Mikroskopju tal-fluworexxenza tat-trażmissjoni: Is-sors tad-dawl ta 'eċitazzjoni jiġi trażmess permezz tal-materjal tal-kampjun permezz ta' kondensatur biex teċita l-fluworexxenza. Kolletturi tad-dawl tal-kamp skur li jintużaw b'mod komuni, jew kolletturi tad-dawl ordinarji, jistgħu jintużaw biex jaġġustaw ir-riflettur biex jikkonverti d-dawl ta 'eċitazzjoni u d-dawl tal-ġenb fuq il-kampjun. Dan huwa mikroskopju tal-fluworexxenza relattivament antikwat. Il-vantaġġ tiegħu huwa li l-fluworexxenza hija b'saħħitha b'ingrandiment baxx, filwaqt li l-iżvantaġġ tagħha huwa li l-fluworexxenza tiddgħajjef hekk kif tiżdied l-ingrandiment. Għalhekk, huwa aħjar għall-osservazzjoni ta 'materjali kampjun akbar.
2. Mikroskopju ta 'fluworexxenza tar-raġġ li jaqa' Dan huwa tip ġdid ta 'mikroskopju ta' fluworexxenza żviluppat fi żminijiet moderni. B'differenza minn dak preċedenti, id-dawl ta 'eċitazzjoni jaqa' 'l isfel mil-lenti oġġettiva għall-wiċċ tal-kampjun, billi tuża l-istess lenti oġġettiva bħall-kondensatur tal-illuminazzjoni u l-lenti oġġettiva għall-ġbir tal-fluworexxenza. Separatur tar-raġġ ta 'kulur doppju jeħtieġ li jiġi miżjud mal-mogħdija ottika, li hija f'angolu ta' 45 grad mal-uranju ħafif. Id-dawl ta 'eċitazzjoni huwa rifless fil-lenti oġġettiva u kkonċentrat fuq il-kampjun. Il-fluworexxenza ġġenerata mill-kampjun, kif ukoll id-dawl ta 'eċitazzjoni rifless mill-wiċċ tal-lenti oġġettiva u l-ħġieġ ta' kopertura, jidħlu fil-lenti oġġettiva simultanjament u jerġgħu lura għas-separatur tar-raġġ dichroic, jisseparaw l-eċitazzjoni u l-fluworexxenza. L-eċitazzjoni residwa mbagħad tiġi assorbita mill-filtru li jimblokka. Jekk jintużaw filtri ta 'eċċitazzjoni differenti/separaturi ta' raġġ ta 'kulur doppju/kombinazzjonijiet ta' filtri li jimblukkaw, jistgħu jissodisfaw il-ħtiġijiet ta 'prodotti ta' reazzjoni fluworexxenti differenti. Il-vantaġġ ta 'dan il-mikroskopju fluworexxenti huwa li l-illuminazzjoni tal-kamp tal-viżjoni hija uniformi, l-immaġini hija ċara, u iktar ma tkun kbira l-ingrandiment, iktar tkun b'saħħitha l-fluworexxenza.
