Preparazzjoni u osservazzjoni ta' kampjuni bijoloġiċi għall-mikroskopija elettronika
Ir-riżoluzzjoni ta 'mikroskopju tiddependi fuq il-wavelength tad-dawl użat. Il-mikroskopju elettroniku, li beda jidher fl-1933, juża raġġ ta 'elettroni b'wavelength ħafna iqsar minn dak ta' dawl viżibbli bħala sors tad-dawl, sabiex ir-riżoluzzjoni li tista 'tikseb titjieb ħafna meta mqabbla ma' dik ta 'mikroskopju ottiku. Id-differenza fis-sorsi tad-dawl tiddetermina wkoll serje ta 'differenzi bejn mikroskopji elettroniċi u mikroskopji ottiċi.
Skont id-differenzi fil-prinċipji tal-immaġini tar-raġġ tal-elettroni u l-modi differenti ta 'azzjoni fuq il-kampjuni, mikroskopji elettroniċi moderni żviluppaw f'ħafna tipi. Bħalissa, dawk l-aktar komunement użati huma mikroskopji elettroniċi ta 'trażmissjoni u mikroskopji elettroniċi tal-iskannjar. It-tkabbir totali tal-ewwel jista' jkun bejn 1000-1000000. It-tkabbir totali ta' dan tal-aħħar jista' jvarja bejn 20 u 300,000 darba. Dan l-esperiment jintroduċi prinċipalment il-preparazzjoni ta 'żewġ tipi ta' kampjuni tal-mikroskopju, mikroskopju elettroniku ta 'trażmissjoni u mikroskopju elettroniku tal-iskannjar.
2. Tagħmir
1. Batterji Escherichia coli (Escherichia coli) slant.
2. Soluzzjoni jew reaġent amyl acetate, aċidu sulfuriku ikkonċentrat, etanol assolut, ilma sterili, 2% fosfotungstat tas-sodju (pH 6.5-8.0) soluzzjoni milwiema, 0.3% polyethylene soluzzjoni tal-formaldehyde (solubbli fil-kloroform), ċelluli Pigment c, aċetat tal-ammonju, plasmid pBR322.
3. Strumenti jew utensili oħra: mikroskopju ottiku ordinarju, malji tar-ram, lembut tal-porċellana, beaker, dixx, dropper sterili, pinzetti sterili, labar, slides, bord tal-għadd, magna tal-kisi bil-vakwu, dryer tal-punt kritiku, eċċ.
3. Passi ta 'operazzjoni
(1) Preparazzjoni tal-kampjun u osservazzjoni għall-mikroskopija elettronika ta 'trasmissjoni
1. Trattament ta 'malji tal-metall
Il-kampjun għall-mikroskopija ottika jitqiegħed fuq slide tal-ħġieġ għall-osservazzjoni. Madankollu, fil-mikroskopija elettronika ta 'trażmissjoni, peress li l-elettroni ma jistgħux jippenetraw il-folja tal-ħġieġ, materjali tal-malji jistgħu jintużaw biss bħala trasportaturi, normalment imsejħa carrier nets. Il-malji tal-ġarr jistgħu jinqasmu f'ħafna speċifikazzjonijiet differenti minħabba materjali u forom differenti, fosthom l-aktar komunement użata hija 200-400 malji (numru ta 'toqob) malji tar-ram. Il-malja tar-ram għandha tiġi ttrattata qabel l-użu biex tneħħi l-ħmieġ u żżommha nadifa, inkella taffettwa l-kwalità tal-film ta 'appoġġ u ċ-ċarezza tar-ritratti tal-kampjun. Dan l-esperiment juża malji tar-ram 400-malji, li jistgħu jiġu ttrattati kif ġej: l-ewwel, xarrab u bliċ bl-amyl acetate għal diversi sigħat, imbagħad laħlaħha b'ilma distillat diversi drabi, u mbagħad xarrabha fl-etanol assolut għal deidrazzjoni. Jekk il-malja tar-ram għadha mhix nadifa wara l-metodi ta 'hawn fuq, tista' tixxarrabha f'aċidu sulfuriku konċentrat dilwit (1:1) għal 1 sa 2 minuti, jew għalliha f'soluzzjoni ta '1% NaOH għal ftit minuti, laħlaħha b'distillat ilma diversi drabi, u mbagħad poġġih f'anidru Dehydrate fl-etanol u warrab.
2. Preparazzjoni ta 'membrana ta' appoġġ
Meta tosserva l-kampjuni, ix-xibka tal-ġarr għandha wkoll tkun mgħottija b'saff ta 'film uniformi u mhux strutturat, inkella kampjuni żgħar joħorġu mit-toqob tax-xibka tal-ġarr. Dan il-film normalment jissejjaħ film ta 'appoġġ jew film trasportatur. Il-film ta 'appoġġ għandu jkun elettroni trasparenti, u l-ħxuna tagħha ġeneralment għandha tkun inqas minn 20nm; taħt l-impatt tar-raġġ ta 'l-elettroni, il-film għandu jkollu wkoll ċerta saħħa mekkanika biex iżomm l-istabbiltà strutturali u jkollu konduttività termali tajba; barra minn hekk, in-netwerk ta 'appoġġ għandu jintuża fil-mikroskopija elettronika M'għandux ikun hemm struttura viżibbli taħt, l-ebda reazzjoni kimika mal-kampjun li qed jinġarr, u l-ebda interferenza mal-osservazzjoni tal-kampjun. Il-ħxuna tagħha hija ġeneralment madwar 15nm. Il-film ta 'appoġġ jista' jkun film tal-plastik (bħal film tal-kollodjoni, film tal-polietilene formaldehyde, eċċ.), film tal-karbonju jew film tal-metall (bħal film tal-berillju, eċċ.). Taħt kundizzjonijiet tax-xogħol normali, film tal-plastik jista 'jissodisfa r-rekwiżiti. Fost il-films tal-plastik, il-film tal-kollodjoni huwa relattivament faċli biex jitħejja, iżda s-saħħa tiegħu mhix tajba daqs il-film tal-polietilene formaldehyde.
