Karatteristiċi u Applikazzjonijiet tal-Mikroskopju Confocal Laser
Filwaqt li f'mikroskopju normali l-pjan ta' l-immaġini ta' l-osservazzjoni huwa iżolat mill-pjani assjali ġirien billi jikkoinċidi l-pjan fokali tal-lenti oġġettiva mad-ditekter, f'mikroskopju konfokali dan l-iżolament jinkiseb billi ddawwal il-kampjun b'punt limitat tad-diffrazzjoni ta' dawl u l-iffiltrar tad-dawl mitluf billi tuża pinhole fil-mogħdija tad-dawl miġbur fil-fokus konjugat ta 'dan il-punt tad-dawl biex jinkiseb dan l-iżolament u b'hekk ittejjeb ir-riżoluzzjoni.
Biss id-dawl rifless lura mis-saff tal-kampjun konjugat jista 'jgħaddi mill-pinhole fil-passaġġ tad-dawl tal-ġbir, filwaqt li l-bqija tar-riflessjonijiet tas-saff tal-kampjun irrilevanti huma mblukkati mill-pinhole. Dan jagħti żieda sinifikanti fir-riżoluzzjoni. Jintwera hawn taħt paragun ġenb ma 'ġenb ta' mikroskopija ta 'fluworexxenza multidimensjonali u mikroskopija konfokali tal-istess kampjun oħxon. Meta jittieħdu serje ta 'immaġini fi pjani fokali differenti, tiġi prodotta immaġni komunement imsejħa "z-stack", li turi r-riżoluzzjoni u l-qligħ tal-kuntrast ipprovdut mill-mikroskopija konfokali u r-raġunijiet sottostanti għal dawn il-qligħ. Jista 'jidher li l-eżaminazzjoni tal-immaġni fil-quċċata tal-munzell fejn il-pjan tal-immaġini huwa 'l fuq mit-tessut jiżvela ammont kbir ta' dawl imxerred fl-immaġni tal-fluworexxenza, filwaqt li l-immaġni tal-mikroskopju konfokali tidher sewda. Dan it-tnaqqis fil-PSF fid-direzzjoni assjali jikkontribwixxi direttament għad-differenza fir-riżoluzzjoni osservata fl-interface ottika fin-nofs tal-munzell z.
Immaġini tal-iskannjar tal-biċċiet ottiċi
Karatteristika oħra tal-mikroskopija konfokali tal-iskannjar bil-lejżer hija li hija teknika tal-immaġini tal-iskannjar. Tekniki tradizzjonali ta’ illuminazzjoni ta’ kamp wiesa’ jdawwal il-kampjun kollu sabiex l-immaġini tkun tista’ tinqabad direttament b’għajnejha jew ditekter, iżda LSCM juża raġġ ta’ dawl iffukat wieħed jew aktar biex jiskennja mill-kampjun, sabiex l-immaġni li tirriżulta tissejjaħ bħala porzjon ottiku, kif muri fid-dijagramma li ġejja. Id-differenza bejn l-illuminazzjoni tradizzjonali ta 'kamp wiesa' u l-illuminazzjoni konfokali tal-iskannjar bil-lejżer tidher hawn taħt.
Għalhekk, mod prattiku ta 'mikroskopija konfokali moderna jidher fil-figura hawn taħt. Id-dawl ta 'eċitazzjoni mill-lejżer jgħaddi minn mera dikrojka u skennjat minn par mirja galvanometru fid-direzzjoni x u d-direzzjoni y tal-kampjun, u l-eċitazzjoni (jew riflessjoni) tal-kampjun tgħaddi minn pinhole fil-PMT ditekter li jrid jiġi rreġistrat, u l-immaġni skannjata rreġistrata tiġi rikostrutta minn kompjuter biex tipproduċi immaġni attwali tal-kampjun.
