Kif tiġi osservata l-morfoloġija taċ-ċelluli mikrobjali taħt mikroskopju?
Il-mikroskopji ġew ivvintati biex jaraw oġġetti jitbissem li ma jistgħux jidhru b'għajnejhom. Il-mikro-organiżmi huma żgħar ħafna, għalhekk għandhom jiġu eżaltati u osservati bl-għajnuna ta 'mikroskopju. Barra minn hekk, hemm ħafna tipi ta 'mikro-organiżmi, għalhekk bażikament il-biċċa l-kbira tal-mikroskopji ottiċi jistgħu josservaw mikro-organiżmi. Il-mistoqsija li jmiss hija x'tip ta 'mikroskopju għandu jintuża għall-osservazzjoni u l-analiżi ta' x'tip ta 'mikro-organiżmi. Mikroskopji komuni li jistgħu jintużaw biex josservaw il-morfoloġija mikrobjali jinkludu mikroskopji bijoloġiċi, mikroskopji tal-kuntrast tal-fażi, mikroskopji invertiti, mikroskopji fluworexxenti, mikroskopji konfokali, eċċ.
Dan li ġej jiddeskrivi l-mikroskopji varji użati biex josservaw mikro-organiżmi:
1. Mikroskopju ottiku ordinarju juża dawl naturali jew dawl bħala s-sors tad-dawl, u l-wavelength tiegħu huwa ta 'madwar 0.4 μm. Ir-riżoluzzjoni tal-mikroskopju hija nofs il-wavelength, jiġifieri, 0.2 μm, u l-iżgħar immaġni viżibbli għall-għajn hija 0.2 mm. Għalhekk, l-użu ta 'mera taż-żejt (immersjoni) biex tkabbar 1000 darbiet tista' tkabbar il-partiċelli ta '0.2μm f'0.2mm viżibbli għall-għajn. Mikroskopji ottiċi ordinarji jistgħu jintużaw għall-osservazzjoni ta 'batterji, actinomycetes u fungi.
2. Il-mikroskopija Darkfield tintuża komunement biex tosserva l-morfoloġija u l-moviment tal-mikrobi mhux imtebba. Wara li l-kondensatur tal-kamp skur jiġi installat fil-mikroskopju ordinarju, id-dawl ma jistax jippenetra direttament min-nofs, u l-kamp viżiv huwa skur. Meta l-kampjun jirċievi dawl oblikwu mit-tarf tal-kondensatur, jista 'jkun imxerred, għalhekk mikro-organiżmi jleqqu bħal batterji jew spirochetes jistgħu jiġu osservati fl-isfond tal-kamp skur.
3. Mikroskopju tal-kuntrast tal-fażi Il-mikroskopju tal-kuntrast tal-fażi juża l-effett tad-dawl tal-pjanċa tad-differenza tal-fażi biex ibiddel il-fażi tad-dawl u l-amplitudni tad-dawl dirett, u jikkonverti d-differenza tal-fażi tad-dawl f'differenza tal-intensità tad-dawl. Taħt mikroskopju ta 'kuntrast ta' fażi, meta d-dawl jgħaddi minn kampjun mhux imtebba, id-differenza fil-fażi tad-dawl hija kkawżata mill-inkonsistenza tad-densità ta 'partijiet differenti tal-kampjun, u jistgħu jiġu osservati l-morfoloġija, l-istruttura interna u l-mod ta' moviment tal-mikro-organiżmi.
4. Mikroskopju tal-fluworexxenza Il-mikroskopju tal-fluworexxenza huwa bażikament l-istess bħal mikroskopju ottiku ordinarju, id-differenza ewlenija hija s-sors tad-dawl, il-filtru u l-kondensatur. Fil-preżent, ħafna minnhom jużaw apparat epi-light, u lampi tal-merkurju bi pressjoni għolja huma komunement użati bħala sorsi tad-dawl, li jistgħu jarmu dawl ultravjola jew blu-vjola. Hemm żewġ tipi ta 'filtri: filtru ta' eċċitazzjoni u filtru ta 'assorbiment. Minbarra l-kondensaturi ġenerali ta 'kamp qawwi, kondensaturi ta' kamp skur jistgħu jintużaw ukoll f'mikroskopji fluworexxenti li jużaw dawl blu biex itejbu l-kuntrast bejn fluworexxenza u l-isfond. Dan il-metodu huwa applikabbli għall-iskoperta jew l-identifikazzjoni ta 'batterji mtebbgħin b'pigmenti fluworexxenti jew flimkien ma' antikorpi fluworexxenti.
5. Mikroskopji elettroniċi jużaw fluss ta 'elettroni bħala sors tad-dawl, u l-wavelength huwa għexieren ta' eluf ta 'darbiet differenti mid-dawl viżibbli, li jtejjeb ħafna r-riżoluzzjoni. Juża wkoll coil manjetiku bħala sistema ta 'amplifikazzjoni ottika, u l-ingrandiment jista' jilħaq għexieren ta 'eluf jew mijiet ta' eluf ta 'drabi. Ħafna drabi jintuża għall-osservazzjoni ta 'partiċelli tal-virus u ultrastruttura batterika.
Osservazzjoni ta' kampjuni mikrobjali mhux imtebba':
Kampjuni mhux imtebba ġeneralment jistgħu jintużaw biex josservaw il-morfoloġija, il-qawwa u l-moviment batterjali. Il-batterji huma bla kulur u trasparenti meta mhux imtebba, u huma osservati taħt mikroskopju prinċipalment bid-differenza bejn l-indiċi refrattiv tal-batterja u l-ambjent tal-madwar. Il-batterji bil-flagelji jimxu b'mod vigoruż, filwaqt li l-batterji mingħajr flagella juru moviment Brownjan irregolari. Batterji vijabbli bħal Treponema pallidum, Leptospira u Campylobacter għandhom forom distintivi u mudelli ta 'moviment, li huma ta' sinifikat dijanjostiku. Metodi użati b'mod komuni huma metodu ta 'waqgħa tal-pressjoni, metodu ta' qatra pendent u metodu kapillari.
1. Applika vażelina madwar it-toqba konkava tal-ħġieġ konkavi nadif permezz ta 'metodu ta' qatra mdendlin, uża ċirku ta 'tilqim biex tieħu ċirku ta' sospensjoni batterjali u poġġiha fiċ-ċentru tal-ħġieġ tal-qoxra, imbagħad allinja t-toqba konkava tal-ħġieġ konkavi b' il-qatra fiċ-ċentru tal-ħġieġ tal-għatu u għattiha, imbagħad dawwarha malajr, agħfas il-ħġieġ tal-għatu ħafif biex tagħmilha teħel sewwa mal-vażelina fuq it-tarf tat-toqba konkava, u osserva taħt mikroskopju ta 'ingrandiment għoli (jew qasam mudlam).
2. Ħu ċirku ta 'sospensjoni batterika b'linja ta' tilqim u poġġiha fiċ-ċentru ta 'slajd tal-ħġieġ nadif permezz ta' metodu ta 'waqgħa tal-pressjoni, u b'ġentilezza tkopri s-sospensjoni batterika b'ħġieġ ta' kopertura, filwaqt li tieħu ħsieb li tevita bżieżaq u overflow tas-sospensjoni batterika . Wara li toqgħod wieqfa għal ftit sekondi, osserva taħt mikroskopju ta 'qawwa għolja f'kamp qawwi (jew kamp skur).
3. Il-metodu kapillari jintuża prinċipalment għall-eżami tal-kinetika tal-batterji anerobiċi. Normalment agħżel 60~70mm twil. Wara li tgħaddi s-sospensjoni ta' batterji anerobiċi minn kapillari b'apertura ta' 0.5-1.0 mm, issiġilla ż-żewġt itruf tal-kapillari bi fjamma. Il-kapillari ġie ffissat fuq il-pjastra tal-ħġieġ b'karta tal-plastik, u osservat taħt lenti ta 'qawwa għolja f'kamp skur.
Osservazzjoni ta' kampjuni mikrobjali mtebbgħin bil-mikroskopju:
Wara li l-kampjun batterjali jiġi mtebba, minħabba l-kuntrast qawwi fil-kulur bejn il-batterja u l-ambjent tal-madwar, il-karatteristiċi morfoloġiċi tal-batterja (bħad-daqs, forma, arranġament, eċċ.) tal-batterja u xi strutturi speċjali (bħal bħala kapsuli, flagella, spori, eċċ.) jistgħu jiġu osservati b'mod ċar taħt mikroskopju ottiku ordinarju, u l-batterji jistgħu jiġu kklassifikati u identifikati skond ir-reattività tat-tbajja '.
(1) Proċedura ġenerali ta 'tbajja' batterjali Il-proċedura ġenerali ta' tbajja' batterjali hija: smear (tnixxif)-fissazzjoni-tbajja'.
1. Smear Preparazzjoni ta 'demm, tnixxijiet, eskrezzjonijiet, fluwidu tat-titqib u kultura likwida, u smears diretti ta' film irqiq fuq slides tal-ħġieġ; awtopsja jew tessuti ta 'l-annimali infettati, smear il-leżjoni b'tampun tal-qoton għat-teħid ta' kampjuni. Għall-preparazzjoni ta 'kolonji batterjali jew lawns fuq medju solidu, l-ewwel uża linja ta' tilqim biex tieħu ċirku ta 'salina normali u poġġiha fiċ-ċentru tal-pjastra tal-ħġieġ, imbagħad uża linja ta' tilqim sterili biex tieħu ammont żgħir ta 'kultura u itħan indaqs fis-salina normali, ifrexha f'wiċċ miksi ta '1cm2, u ħalliha tinxef b'mod naturali f'temperatura tal-kamra jew nixxef bil-mod f'distanza.
2. L-iskop tal-iffissar huwa li joqtol il-batterja, tikkoagula l-proteina u l-istruttura tal-batterja, u tiffaċilita t-tbajja '; jippromwovi batterji biex jaderixxu mal-pjastra biex jevitaw li jinħaslu mill-ilma waqt il-ħasil; ibdel il-permeabilità tal-batterja għal żebgħa, li hija ta 'benefiċċju għat-tbajja' ta' strutturi intraċellulari batteriċi. Ġeneralment jiġi ffissat billi jissaħħan bi fjamma, u t-tiċrit imnixxef jgħaddi malajr mill-fjamma għal 3 darbiet. Huwa aħjar li ma tinħaraqx il-ġilda fuq in-naħa ta 'wara meta tmiss il-pjastra.
3. Żebgħa Skont skopijiet ta 'spezzjoni differenti, agħżel metodi ta' żebgħa differenti għaż-żebgħa. Meta żebgħa, żid is-soluzzjoni taż-żebgħa qatra biex iżżid il-kopertura.
4. Mordant Kwalunkwe sustanza li tista 'ssaħħaħ l-affinità bejn iż-żebgħa u l-oġġett miżbugħ, tiffissa ż-żebgħa fuq l-oġġett miżbugħ u tikkawża bidla fil-permeabilità tal-membrana taċ-ċellula tissejjaħ mordant. Użati komunement huma alum, aċidu tanniku, imluħa tal-metall u jodju, eċċ., U t-tisħin jintuża wkoll biex jippromwovi l-kulur. Mordants jistgħu jintużaw bejn tbajja primarja u counterstaining, u jistgħu jintużaw ukoll wara l-iffissar jew li jinsabu f'fissattiv u tbajja.
5. Dekolorizzazzjoni Kwalunkwe aġent kimiku li jista 'jneħħi l-kulur tal-oġġett miżbugħ jissejjaħ decolorizer. L-etanol, l-aċetun, eċċ huma komunement użati bħala dekolorizzaturi. L-aġent decolorizing jista 'jiskopri l-grad ta' stabbiltà tal-kombinazzjoni ta 'batterji u żebgħa, li jistgħu jintużaw għal tbajja differenzjali.
6. Il-batterji kontra t-tebgħa jew l-istrutturi tagħhom li ġew dekolorizzati ħafna drabi huma counterstained b'soluzzjoni counterstain għal osservazzjoni faċli. Il-kulur tas-soluzzjoni tal-kontrostaining huwa differenti minn dak tas-soluzzjoni primarja taż-żebgħa biex tifforma kuntrast qawwi. Il-kontrostaining m'għandux ikun qawwi wisq, sabiex ma jgħattix il-kulur tat-tebgħa inizjali.
