Kif tista 'tagħżel il-mikroskopju konfokali t-tajjeb għalik? Hemm xi metodu speċifiku?
Il-mikroskopija konfokali għandha aktar vantaġġi minn mikroskopija ta 'kamp wiesa'. Il-mikroskopija konfokali tista 'tagħmel sezzjoni ottika kontinwa ta' kampjuni u teskludi interferenza tas-sinjali minn pjani mhux fokali. Għal din ir-raġuni, l-applikazzjoni tal-mikroskopija konfokali hija tabilħaqq aktar komuni. Madankollu, hemm aktar u aktar mikroskopji konfokali fis-suq. Kif tagħżel?
Il-mikroskopija konfokali għandha aktar vantaġġi minn mikroskopija ta 'kamp wiesa'. Il-mikroskopija konfokali tista 'tagħmel sezzjonijiet ottiċi kontinwi ta' kampjuni u teskludi interferenza tas-sinjal minn pjani mhux fokali. Għal din ir-raġuni, il-mikroskopija konfokali hija tabilħaqq aktar komuni. Madankollu, hemm aktar u aktar mikroskopji konfokali fis-suq. Kif tagħżel? Meta tagħżel mikroskopju konfokali, hemm żewġ konsiderazzjonijiet bażiċi u importanti: it-tip ta 'kampjun li trid tistudja (eż., ċelluli fissi jew ħajjin), u t-tip ta' analiżi li trid twettaq (eż., proċessi ċellulari statiċi jew dinamiċi).
Immaġini konfokali ta 'ċelluli fissi
Biex immaġni fissi u mtebbgħin ċelluli jew tessuti, aħna ġeneralment jagħżlu laser scanning confocal (LSCM). Dan huwa prinċipalment minħabba li ċ-ċelloli mejta fissi m'għandhomx avvenimenti bijoloġiċi rapidi fiċ-ċelloli ħajjin u jistgħu jibbenefikaw aħjar mir-riżoluzzjoni spazjali ogħla ta 'LSCM. L-immaġini LSCM huwa li l-kampjun ottikament jinqatgħu bil-lejżer, u l-veloċità tal-iskannjar (skond il-veloċità tal-mera tal-firxa tal-iskannjar) hija ġeneralment 1fps. Ħinijiet ta 'espożizzjoni itwal ifissru riskju akbar ta' photobleaching, iżda għal ċelluli mejta fissi l-ħin mhuwiex kritiku u nistgħu medjawh billi nieħdu stampi multipli.
Immaġini konfokali ta 'ċelluli ħajjin
L-immaġini taċ-ċelloli ħajjin jeħtieġ protezzjoni addizzjonali minn ambjenti li ma jagħmlux ħsara. Waqt l-immaġini, l-ewwel konsiderazzjoni tagħna hija li nżommu l-vijabbiltà u s-saħħa taċ-ċelluli. Elementi ta 'tisħin b'temperatura kostanti u sistemi ta' perfużjoni huma essenzjali, speċjalment għal studji time-lapse. L-avvenimenti bijokimiċi mgħaġġla li jikkontrollaw l-istat fiżjoloġiku taċ-ċelloli ħajjin huma dak li ħafna nies iridu jistudjaw, iżda dawn l-avvenimenti huma mgħaġġla wisq għal LSCM konvenzjonali. Barra minn hekk, espożizzjoni fit-tul għal LSCM indotta wkoll ħsara tad-dawl tossiku liċ-ċelloli. Għalhekk, l-immaġini taċ-ċelloli ħajjin teħtieġ mikroskopji konfokali speċjali.
Ġeneralment hemm żewġ għażliet għall-immaġini konfokali ta 'ċelloli ħajjin: konfokali ta' skannjar bil-lejżer b'skannjar mgħaġġel u konfokali tad-diska tal-għażil. Il-mikroskopija konfokali ta 'skannjar veloċi tissostitwixxi galvanometersmirrors aktar bil-mod b'mirja ta' skanjar reżonanti aktar veloċi, li jippermettu veloċitajiet ta 'skanjar sa 30fps; filwaqt li spinning disk confocals (SDCMs) għandhom il-vantaġġ ta 'skanjar aktar mgħaġġel (għalkemm inevitabbilment b'telf ta' riżoluzzjoni Spazjali), il-veloċità tagħha tista 'teoretikament tilħaq 2000fps (fil-prattika ħafna drabi hija limitata minn fatturi oħra).
Jekk inti mħasseb dwar photobleaching jew sinjal fluworexxenti dgħajjef ħafna, allura SDCM jista 'jkun aktar adattat. SDCM juża żewġ diski li jduru b'microwells arrayed biex ixerred id-dawl ta 'eċitazzjoni. B'differenza LSCM, li tiskennja l-post tal-kampjun, SDCM jakkwista spots multipli kull darba (madwar 100 pixel spots), għalhekk il-veloċità tiżdied ħafna, u l-photobleaching ta 'SDCM u inqas fototossiċità. Madankollu, tista 'wkoll tuża confocals ta' skannjar veloċi biex iżżid il-veloċità tal-iskannjar, flimkien ma 'ditekters sensittivi ħafna, u tnaqqas l-enerġija tad-dawl ta' eċċitazzjoni biex tnaqqas il-fototossiċità, li tista 'żżomm il-funzjonijiet sinjuri ta' confocals tradizzjonali.
Sistema awtomatizzata tal-immaġini konfokali
Xi riċerkaturi jixtiequ jsibu modi biex jimmodifikaw il-mikroskopju biex jaqdi l-bżonnijiet individwali tagħhom. U xi riċerkaturi lanqas biss huma interessati dwar kif il-mikroskopji fil-fatt jaħdmu. Għal dawn tal-aħħar, mikroskopju konfokali awtomatizzat jista 'jkun aktar għall-Predisposizzjoni tagħhom. Pereżempju, l-Olympus FluoViewFV10i huwa mikroskopju konfokali tal-laser 4-desktop kompletament awtomatiku. L-istruttura integrata kompatta tagħha ma teħtieġ kważi l-ebda spazju ta 'installazzjoni. Dan it-tip ta 'strument huwa ideali għal riċerkaturi li għandhom bżonn jagħmlu ħafna akkwist tad-dejta tal-immaġni kuljum, iżda ovvjament ma jirriflettux bis-sħiħ il-funzjonalità u l-flessibilità tal-konfokali tradizzjonali. Barra minn hekk, in-NikonA1 hija wkoll sistema konfokali kompletament awtomatika. Bħall-biċċa l-kbira tal-mikroskopji tal-iskannjar konfokali konvenzjonali, in-NikonA1 juża ras tal-iskannjar tal-galvanometru, li għandu riżoluzzjoni ogħla mill-A1R b'ras tal-iskannjar ibrida, iżda veloċità kemmxejn aktar baxxa (A1R ~ 30fps)
