Differenzi Bejn Mikroskopji Fluworexxenti u Mikroskopji tad-Dawl Ordinarji
Mikroskopji fluworexxenti huma differenti minn mikroskopji ottiċi konvenzjonali. Minflok ma josservaw kampjuni b'dawl minn sors ta 'dawl ordinarju, huma jużaw dawl ta' wavelength speċifiku (ġeneralment dawl ultravjola jew blu-vjola) biex jeċitaw sustanzi fluworexxenti fi ħdan il-kampjun fuq il-pjastra tal-mikroskopju, u jikkawża li dawn is-sustanzi jarmu fluworexxenza. Għalhekk, is-sors tad-dawl ta 'mikroskopju fluworexxenti ma jdawwalx direttament il-kampjun; jaġixxi bħala sors ta 'enerġija biex teċita s-sustanzi fluworexxenti endoġeni fil-kampjun. Nistgħu naraw il-kampjun mhux minħabba l-illuminazzjoni mis-sors tad-dawl innifsu, iżda minħabba li s-sustanzi fluworexxenti ġewwa l-kampjun jassorbu l-enerġija tad-dawl ta 'eċitazzjoni u mbagħad jarmu fluworexxenza.
Minn dan isegwi li l-karatteristika ewlenija ta 'mikroskopju fluworexxenti hija li s-sors tad-dawl tiegħu jista' jforni dawl ta 'eċitazzjoni ta' faxxa ta 'wavelength speċifika, li jippermetti lis-sustanzi fluworexxenti fil-kampjun spezzjonat jarmu fluworexxenza ta' intensità suffiċjenti. Sadanittant, mikroskopju fluworexxenti għandu jkun mgħammar b'sistema ta 'filtru korrispondenti. Huwa strument essenzjali għall-istokimika tal-fluworexxenza. Mikroskopju fluworexxenti huwa magħmul prinċipalment minn sors ta 'dawl ta' pressjoni ultra-għolja, sistema ta 'filtru (inklużi filtri ta' eċċitazzjoni u filtri ta 'barriera), sistema ottika u sistema fotografika. Jaħdem billi juża dawl ta 'wavelength speċifiku biex teċita sustanzi fluworexxenti.
① Metodi ta 'Eċċitazzjoni tal-Fluworexxenza Skond il-medda ta' wavelength tad-dawl ta 'eċitazzjoni, hemm żewġ tipi: metodu ta' eċċitazzjoni UV (metodu ta 'illuminazzjoni ultravjola) u metodu ta' eċċitazzjoni BV (metodu ta 'illuminazzjoni blu-vjola).Il-metodu ta' eċċitazzjoni UV juża dawl ultravjola iqsar minn 400 nm għal eċċitazzjoni. Jiġġenera fluworexxenza inviżibbli, għalhekk il-fluworexxenza osservata ġejja mill-kampjun innifsu. Dan il-metodu jiddistingwi faċilment il-fluworexxenza speċifika mill-awtofluworexxenza tal-isfond.
② Metodu ta 'eċċitazzjoni BVIl-metodu ta' eċċitazzjoni BV juża dawl ta 'eċċitazzjoni li jvarja minn vjola għal blu ċċentrata f'404 nm u 434 nm. Peress li d-dawl blu jintuża biex irradja l-kampjun, is-sistema tal-filtru tal-eċitazzjoni għal dan il-metodu għandha timblokka kompletament id-dawl blu u tippermetti biss li tgħaddi d-dawl aħdar u isfar meħtieġ. Għal tbajja ta 'antikorpi fluworexxenti, il-wavelength ta' assorbiment massimu tad-dawl ta 'eċitazzjoni huwa qrib il-wavelength ta' emissjoni massima taż-żebgħa fluworexxenti. Għal din ir-raġuni, is-sett tal-filtru għall-eċitazzjoni BV għandu juża filtru ta 'barriera ta' qtugħ. Dan il-metodu juża dawl blu għall-eċitazzjoni, għalhekk l-effiċjenza tal-ġbir tal-fluworexxenza hija relattivament għolja u jistgħu jinkisbu stampi isbaħ. L-iżvantaġġ tiegħu huwa li l-fluworexxenza 'l fuq minn 500 nm ma tistax tiġi skoperta, u immaġini isfar-aħdar biss jistgħu jidhru 'l fuq minn 500 nm. Fit-tbajja 'l-antikorpi fluworexxenti, il-ġudizzju ta' l-ispeċifiċità jiddependi ħafna fuq l-informazzjoni tal-kulur, għalhekk l-iżvantaġġ tal-metodu ta 'eċċitazzjoni BV jista' jkun limitazzjoni ewlenija meta tiddiskuti l-ispeċifiċità sottili.
