Differenza bejn mikroskopju fluworexxenti u mikroskopju normali
Dan l-aħħar ippruvajt nagħmel xi sezzjonijiet iffriżati tal-ġrieden. Sussegwentement, se nuża mikroskopju fluworexxenti biex nara jekk il-virus li injettajt hux fiż-żona tal-moħħ li rrid. Xi prinċipji bażiċi tal-mikroskopija tal-fluworexxenza jeħtieġ li jiġu mgħallma fil-qosor, u jien se naqsamhom hawn.
Il-mikroskopji tal-fluworexxenza jużaw dawl ultravjola bħala sors tad-dawl biex idawwal l-oġġett li qed jiġi spezzjonat, u b'hekk l-oġġett joħroġ id-dawl, u mbagħad josserva l-oġġett taħt il-mikroskopju. Jintuża prinċipalment għal ċelluli immunofluworexxenti. Huwa magħmul prinċipalment minn sors tad-dawl, sistema ta 'pjanċa tal-filtru u sistema ottika. L-immaġni fluworexxenti tal-kampjun hija osservata permezz tal-ingrandiment tal-ocular u lenti oġġettiva. Ejja nagħtu ħarsa lejn id-differenza bejn mikroskopju fluworexxenti u mikroskopju ottiku ordinarju.
1. Ħares lejn il-metodu tad-dawl
Il-metodu ta 'illuminazzjoni tal-mikroskopju fluworexxenti huwa ġeneralment epi-illuminazzjoni, li jfisser li s-sors tad-dawl jitqiegħed fuq il-kampjun tat-test permezz tal-lenti oġġettiva.
2. Ħares lejn ir-riżoluzzjoni
Mikroskopji fluworexxenti jużaw dawl ultravjola bħala sors tad-dawl, li għandu wavelength iqsar iżda riżoluzzjoni ogħla minn mikroskopji ottiċi ordinarji.
3. Differenzi fil-filtri
Il-mikroskopji tal-fluworexxenza jużaw żewġ filtri speċjali, wieħed użat quddiem is-sors tad-dawl biex jiffiltra d-dawl viżibbli, u wieħed użat bejn il-lenti oġġettiva u l-ocular biex jiffiltra r-raġġi ultravjola, li jistgħu jipproteġu l-għajnejn tal-bniedem.
Il-mikroskopju tal-fluworexxenza huwa wkoll tip ta 'mikroskopju ottiku. Ir-raġuni ewlenija hija li l-wavelength eċċitati mill-mikroskopju fluworexxenti huwa qasir, għalhekk dan iwassal għad-differenza fl-istruttura u l-użu bejn mikroskopju fluworexxenti u mikroskopju ordinarju. Ħafna mikroskopji fluworexxenti għandhom funzjoni tajba li jaqbdu dawl dgħajjef. , għalhekk il-kapaċità ta 'l-immaġini tagħha hija wkoll tajba taħt fluworexxenza estremament dgħajfa. Flimkien mat-titjib kontinwu tal-mikroskopji fluworexxenti f'dawn l-aħħar snin, il-ħoss ukoll tnaqqas ħafna. Għalhekk, qed jintużaw aktar u aktar mikroskopji fluworexxenti.
Għarfien dwar mikroskopija ta 'fluworexxenza b'żewġ fotoni
Il-prinċipju bażiku ta 'eċitazzjoni b'żewġ fotoni huwa: taħt il-kondizzjoni ta' densità għolja ta 'fotoni, molekuli fluworexxenti jistgħu jassorbu żewġ fotoni ta' tul ta 'mewġ twil fl-istess ħin, u wara ħajja qasira tal-hekk imsejħa stat eċċitati, jarmu foton b'tul ta' mewġ iqsar . ;L-effett huwa l-istess bħall-użu ta 'foton b'wavelength nofs il-wavelength twil biex teċita molekuli fluworexxenti. Eċitazzjoni ta 'żewġ fotoni teħtieġ densità għolja ta' fotoni. Sabiex ma ssirx ħsara liċ-ċelloli, mikroskopji b'żewġ fotoni jużaw lejżers tal-polz b'mod ta 'enerġija għolja msakkra. Dan il-lejżer jarmi dawl tal-lejżer b'enerġija massima għolja u enerġija medja baxxa, b'wisa 'tal-polz ta' 100 femtoseconds biss u frekwenza ta '80 sa 100 MHz. Meta tuża lenti oġġettiva b'apertura numerika għolja biex tiffoka l-fotoni tal-laser pulsat, id-densità tal-fotoni fil-fokus tal-lenti oġġettiva hija l-ogħla. Eċitazzjoni b'żewġ fotoni sseħħ biss fil-fokus tal-lenti oġġettiva, għalhekk il-mikroskopju b'żewġ fotoni ma jeħtieġx pinhole konfokali, li jtejjeb l-effiċjenza ta 'skoperta tal-Fluworexxenza.
Fil-fenomenu fluworexxenti ġenerali, minħabba d-densità baxxa tal-foton tad-dawl ta 'eċitazzjoni, molekula fluworexxenti tista' biss tassorbi foton wieħed fl-istess ħin u mbagħad temetti foton fluworexxenti wieħed permezz ta 'transizzjoni radjattiva. Din hija fluworexxenza b'foton wieħed. Għall-proċess ta 'eċitazzjoni tal-fluworexxenza bl-użu tal-laser bħala s-sors tad-dawl, jistgħu jseħħu fenomeni ta' fluworexxenza b'żewġ fotoni jew saħansitra b'ħafna fotoni. F'dan il-każ, l-intensità tas-sors tad-dawl ta 'eċitazzjoni użat hija għolja, u d-densità tal-foton tissodisfa r-rekwiżit li l-molekuli fluworexxenti jassorbu żewġ fotoni fl-istess ħin. Fil-proċess ta 'użu ta' lejżers ordinarji bħala sorsi ta 'dawl ta' eċċitazzjoni, id-densità tal-fotoni għadha mhix biżżejjed biex tipproduċi assorbiment ta 'żewġ fotoni. Lejżers tal-polz Femtosecond normalment jintużaw, u l-qawwa istantanja tagħhom tista 'tilħaq il-livell ta' megawatt. Għalhekk, il-wavelength ta 'fluworexxenza b'żewġ fotoni huwa iqsar mill-wavelength tad-dawl ta' eċċitazzjoni, li huwa ekwivalenti għall-effett prodott minn eċitazzjoni ta 'wavelength ta' nofs eċitazzjoni.
