X'inhu l-iskop ta 'mikroskopju konfokali?
1. Wara l-isforzi u t-titjib tal-predeċessuri kbar tagħna, il-mikroskopju ottiku laħaq il-punt ta 'perfezzjoni. Fil-fatt, mikroskopji ordinarji jistgħu jagħtuna immaġini mikroskopiċi sbieħ sempliċiment u malajr. Madankollu, ġara avveniment li ġab innovazzjoni rivoluzzjonarja għal din id-dinja tal-mikroskopju kważi perfetta, li hija l-invenzjoni tal- "mikroskopju konfokali tal-iskannjar tal-laser". Il-karatteristika ta 'dan it-tip ġdid ta' mikroskopju hija li tadotta sistema ottika li tiġbed biss informazzjoni ta 'l-immaġini fuq il-wiċċ fejn il-fokus huwa kkonċentrat, u tirrestawra l-informazzjoni miksuba fil-memorja ta' l-immaġini filwaqt li tbiddel il-fokus, sabiex l-informazzjoni 3D kompluta tkun tista 'tiġi miksuba. Immaġni qawwija ta 'intelliġenza. B'dan il-metodu, huwa possibbli li tinkiseb faċilment informazzjoni dwar il-forma tal-wiċċ li ma tistax tiġi kkonfermata b'mikroskopju normali. Barra minn hekk, għal mikroskopji ottiċi ordinarji, "iż-żieda tar-riżoluzzjoni" u "l-approfondiment fil-fond tal-fokus" huma kundizzjonijiet kontradittorji, speċjalment f'ingrandimenti għoljin, din il-kontradizzjoni hija aktar prominenti, iżda f'termini ta 'mikroskopji konfokali, din il-problema tissolva faċilment.
2. Vantaġġi ta 'sistema ottika confocal
Dijagramma skematika tal-mikroskopju konfokali tal-lejżer
Is-sistema ottika konfokali twettaq illuminazzjoni tal-punt fuq il-kampjun, u d-dawl rifless jiġi wkoll riċevut mir-riċettur tal-punt. Meta l-kampjun jitqiegħed fil-pożizzjoni tal-fokus, kważi d-dawl rifless kollu jista 'jilħaq il-fotoreċettur, u meta l-kampjun ikun barra mill-fokus, id-dawl rifless ma jistax jilħaq il-fotoreċettur. Jiġifieri, fis-sistema ottika confocal, l-immaġni biss li tikkoinċidi mal-punt fokali se toħroġ, u t-tikek tad-dawl u d-dawl imxerred inutli se jiġu protetti.
3. Għaliex tuża laser?
Fis-sistema ottika konfokali, il-kampjun huwa mdawwal f'punt, u d-dawl rifless jiġi wkoll riċevut minn fotoreċettur punt. Għalhekk, sors tad-dawl punt isir meħtieġ. Lejżers huma sorsi ta 'dawl punt ħafna. Fil-biċċa l-kbira tal-każijiet, is-sorsi tad-dawl tal-lejżer jintużaw bħala sorsi tad-dawl għal mikroskopji konfokali. Barra minn hekk, il-karatteristiċi ta 'monokromatiċità, direzzjonalità u forma ta' raġġ eċċellenti tal-lejżer huma wkoll raġunijiet importanti għall-adozzjoni wiesgħa tagħha.
4. L-osservazzjoni f'ħin reali bbażata fuq skannjar b'veloċità għolja ssir possibbli
Għall-iskannjar bil-lejżer, l-unità ta 'deflessjoni ottika attivata bl-akustika (Acoustic Optical Deflector, element AO) tintuża fid-direzzjoni orizzontali, u s-Servo Galvano-mera tintuża fid-direzzjoni vertikali. Peress li l-unità ta 'deflessjoni akusto-ottika m'għandha l-ebda parti ta' vibrazzjoni mekkanika, tista 'twettaq skanjar b'veloċità għolja u osservazzjoni f'ħin reali fuq l-iskrin tal-monitor hija possibbli. Din l-immaġini b'veloċità għolja hija oġġett importanti ħafna li taffettwa direttament il-veloċità tal-iffukar u l-irkupru tal-pożizzjoni.
5. Ir-relazzjoni bejn il-pożizzjoni tal-fokus u l-luminożità
Fis-sistema ottika confocal, il-luminożità tal-kampjun hija l-massimu meta l-kampjun jitqiegħed b'mod korrett fil-pożizzjoni fokali, u l-luminożità tiegħu tonqos drastikament qabel u wara (il-linja solida fil-Figura 4). Is-selettività sensittiva tal-pjan fokali hija wkoll il-prinċipju tad-determinazzjoni tad-direzzjoni tal-għoli tal-mikroskopju konfokali u l-espansjoni tal-fond fokali. B'kuntrast, mikroskopji ottiċi ordinarji m'għandhomx bidliet sinifikanti fil-luminożità qabel u wara l-pożizzjoni tal-fokus.
6. Kuntrast għoli, riżoluzzjoni għolja
F'mikroskopji ottiċi ordinarji, minħabba l-interferenza tad-dawl rifless mill-parti tal-fokus, tikkoinċidi mal-parti tal-immaġini tal-fokus, li tirriżulta fi tnaqqis fil-kuntrast tal-immaġni. Min-naħa l-oħra, fis-sistema ottika konfokali, id-dawl imxerred barra l-punt fokali u d-dawl imxerred ġewwa l-lenti oġġettiva huma kważi kompletament imneħħija, sabiex tkun tista 'tinkiseb immaġni b'kuntrast għoli ħafna. Barra minn hekk, minħabba li d-dawl jgħaddi mill-lenti oġġettiva darbtejn, l-immaġni tal-punt hija inċiżiva l-ewwel, li ttejjeb ukoll il-qawwa tar-riżoluzzjoni tal-mikroskopju.
7. Funzjoni ta 'lokalizzazzjoni ottika
Fis-sistema ottika konfokali, id-dawl rifless minbarra l-punt li jikkoinċidi mal-punt fokali huwa protett mill-mikropori. Għalhekk, meta tosserva kampjun tridimensjonali, immaġni hija ffurmata bħallikieku l-kampjun huwa mqatta 'mal-pjan fokali (Figura 5). Dan l-effett huwa magħruf bħala lokalizzazzjoni ottika u hija waħda mill-ispeċjalitajiet tas-sistemi ottiċi konfokali.
8. Iffoka l-funzjoni tal-memorja mobbli
L-hekk imsejjaħ dawl rifless barra l-punt fokali huwa protett mill-mikropori. Min-naħa l-oħra, jista 'jitqies li l-punti kollha fuq l-immaġni ffurmata mis-sistema ottika konfokali jikkoinċidu mal-punt fokali. Għalhekk, jekk il-kampjun tridimensjonali jiġi mċaqlaq tul l-assi Z (assi ottiku), l-immaġini huma akkumulati u maħżuna fil-memorja, u finalment l-immaġni ffurmata mill-kampjun kollu u l-punt fokali tinkiseb. Il-funzjoni li tapprofondixxi b'mod infinit il-fond tal-fokus b'dan il-mod tissejjaħ il-funzjoni tal-memorja mobbli.
9. Funzjoni tal-kejl tal-forma tal-wiċċ
F'termini ta 'funzjoni ta' ċaqliq tal-fokus, il-forma tal-wiċċ tal-kampjun tista 'titkejjel b'mod mingħajr kuntatt billi żżid ċirkwit ta' reġistrazzjoni tal-għoli tal-wiċċ. Ibbażat fuq din il-funzjoni, huwa possibbli li jiġu rreġistrati l-koordinati tal-assi Z iffurmati mill-valur massimu tal-luminanza f'kull pixel, u abbażi ta 'din l-informazzjoni, tista' tinkiseb informazzjoni relatata mal-forma tal-wiċċ tal-kampjun.
10. Funzjoni ta 'kejl ta' mikro-daqs ta 'preċiżjoni għolja
L-unità li tirċievi d-dawl tadotta sensur tal-immaġini CCD 1-dimensjonali, għalhekk ma tiġix affettwata mill-inklinazzjoni tal-iskannjar tal-apparat tal-iskannjar, sabiex il-kejl ta 'preċiżjoni għolja jkun jista' jitlesta. Barra minn hekk, minħabba l-użu tal-funzjoni tal-memorja tal-bidla tal-fokus b'fond tal-fokus aġġustabbli (approfondiment), l-iżball tal-kejl ikkawżat mill-bidla tal-fokus jista 'jiġi eliminat.
11. Analiżi tridimensjonali tal-immaġni
Bl-użu tal-funzjoni tal-kejl tal-forma tal-wiċċ, tista 'faċilment toħloq immaġni tridimensjonali tal-wiċċ tal-kampjun. Mhux dan biss, iżda wkoll jista 'jwettaq varjetà ta' analiżi bħal: kejl tal-ħruxija tal-wiċċ, żona, volum, erja tal-wiċċ, ċirkolarità, raġġ, tul massimu, perimetru, ċentru tal-gravità, immaġni tomografika, trasformazzjoni FFT, kejl tal-wisa 'tal-linja, eċċ .
Mikroskopju tal-iskannjar konfokali tal-lejżer jista 'jintuża mhux biss għall-osservazzjoni tal-morfoloġija taċ-ċelluli, iżda wkoll għal analiżi kwantitattiva ta' komponenti bijokimiċi intraċellulari, statistika ta 'densità ottika u kejl tal-morfoloġija taċ-ċelluli.
