L-iskop, l-attributi, u l-użu ta 'mikroskopju fluworexxenti
Il-prinċipju u l-karatteristiċi strutturali tal-mikroskopju fluworexxenti: il-mikroskopju fluworexxenti juża sors ta 'dawl punt b'effiċjenza luminuża għolja biex jarmi ċertu wavelength ta' dawl (bħal dawl ultravjola 3650 in jew dawl blu vjola 4200 in) permezz tas-sistema tal-filtru bħala l-eċitazzjoni dawl biex jistimula l-fluworexxenza fil-kampjun. Wara li s-sustanza temetti fluworexxenza ta 'diversi kuluri, hija osservata permezz tal-ingrandiment tal-lenti oġġettiva u l-ocular. B'dan il-mod, taħt sfond ta 'kuntrast qawwi, anki jekk il-fluworexxenza hija dgħajfa ħafna, huwa faċli li tidentifika u għandha sensittività għolja. Jintuża prinċipalment għar-riċerka tal-istruttura u l-funzjoni taċ-ċelluli u l-kompożizzjoni kimika. L-istruttura bażika ta 'mikroskopju fluworexxenti hija magħmula minn mikroskopju ottiku ordinarju flimkien ma' xi aċċessorji (bħal sors ta 'dawl fluworexxenti, filtru ta' eċċitazzjoni, splitter tar-raġġ b'żewġ kuluri u filtru li jimblokka, eċċ.). Sors tad-dawl fluworexxenti—ġeneralment uża fanal tal-merkurju bi pressjoni ultra-għolja (50-200W), li jista’ jarmi dawl ta’ wavelengths varji, iżda kull sustanza fluworexxenti għandha wavelength ta’ eċċitazzjoni li tipproduċi l-aktar fluworexxenza qawwija, għalhekk filtru ta’ eċċitazzjoni (Ġeneralment, hemm filtri ta 'eċitazzjoni ultravjola, vjola, blu u aħdar), li jippermettu biss li dawl ta' eċċitazzjoni ta 'ċertu wavelength jgħaddi minn ġol-kampjun u irradja l-kampjun, filwaqt li jassorbu dawl ieħor. Wara li kull sustanza tiġi irradjata b'dawl ta 'eċitazzjoni, temetti fluworexxenza viżibbli b'wavelength itwal mill-wavelength tal-irradjazzjoni fi żmien qasir ħafna. Il-fluworexxenza hija speċifika u ġeneralment aktar dgħajfa mid-dawl ta 'eċitazzjoni. Sabiex tosserva fluworexxenza speċifika, huwa meħtieġ filtru li jimblokka (jew li jrażżan) wara l-lenti oġġettiva.
Għandu żewġ funzjonijiet: wieħed huwa li jassorbi u jimblokka d-dawl ta 'eċitazzjoni milli jidħol fl-ocular, sabiex ma jiddisturbax il-fluworexxenza u jagħmel ħsara lill-għajnejn; l-ieħor huwa li tagħżel u tħalli l-fluworexxenza speċifika tgħaddi, li turi kulur fluworexxenti speċifiku. Iż-żewġ filtri għandhom jintużaw flimkien.
Hemm żewġ tipi ta 'mikroskopji fluworexxenti f'termini tal-mogħdijiet ottiċi tagħhom:
1. Mikroskopju tal-fluworexxenza tat-trażmissjoni: Is-sors tad-dawl ta 'eċitazzjoni jgħaddi mill-materjal tal-kampjun minn lenti tal-kondensatur biex teċita l-fluworexxenza. Kollettur ta 'kamp skur huwa komunement użat, u kollettur ordinarju jista' jintuża wkoll biex jaġġusta l-mera sabiex id-dawl ta 'eċċitazzjoni jiġi ridirett u bypassed lejn il-kampjun. Dan huwa mikroskopju fluworexxenti antik. Il-vantaġġ huwa li l-fluworexxenza hija qawwija b'ingrandiment baxx, iżda l-iżvantaġġ huwa li l-fluworexxenza tonqos biż-żieda ta 'ingrandiment. Għalhekk, huwa aħjar li tosserva materjali kampjun akbar.
2. Mikroskopju ta 'epi-fluworexxenza huwa tip ġdid ta' mikroskopju ta 'fluworexxenza żviluppat fi żminijiet moderni. Id-differenza hija li d-dawl ta 'eċitazzjoni jaqa' mil-lenti oġġettiva 'l isfel sal-wiċċ tal-kampjun, jiġifieri, l-istess lenti oġġettiva tintuża bħala l-kondensatur tal-illuminazzjoni u l-lenti oġġettiva għall-ġbir tal-fluworexxenza. Splitter tar-raġġ dichroic jeħtieġ li jiġi miżjud fil-mogħdija tad-dawl, li hija 45 grad 'il bogħod mill-uranju ħafif. Id-dawl ta 'eċitazzjoni huwa rifless fil-lenti oġġettiva u miġbur fuq il-kampjun. Il-fluworexxenza ġġenerata mill-kampjun u d-dawl ta 'eċitazzjoni rifless mill-wiċċ tal-lenti tal-lenti tal-objettiv u l-wiċċ tal-ħġieġ tal-għatu jidħlu fil-lenti tal-objettiv fl-istess ħin, u jerġgħu lura għall-isplitter tar-raġġ b'żewġ kuluri biex id-dawl tal-eċitazzjoni Separat mill-fluworexxenza , id-dawl ta 'eċitazzjoni residwu jiġi assorbit billi jimblokka l-filtri. Bħal bidla għal kombinazzjoni ta 'filtru ta' eċċitazzjoni differenti / splitter tar-raġġ b'żewġ kuluri / filtru li jimblokka, jista 'jissodisfa l-ħtiġijiet ta' prodotti ta 'reazzjoni fluworexxenti differenti. Il-vantaġġ ta 'dan it-tip ta' mikroskopju fluworexxenti huwa li l-illuminazzjoni tal-kamp viżiv hija uniformi, l-immaġini hija ċara, u iktar ma jkun kbir l-ingrandiment, iktar tkun b'saħħitha l-fluworexxenza.
(2) Kif tuża l-mikroskopju fluworexxenti.
1. Ixgħel is-sors tad-dawl, u l-lampa tal-merkurju ta 'pressjoni ultra-għolja teħtieġ tisħon għal ftit minuti biex tilħaq l-iktar punt qawwi.
2. Il-mikroskopju tal-fluworexxenza tat-trażmissjoni jeħtieġ li jinstalla l-filtru ta 'eċċitazzjoni meħtieġ bejn is-sors tad-dawl u l-kondensatur, u jinstalla l-filtru tal-imblukkar korrispondenti wara l-lenti oġġettiva. Mikroskopji epi-fluworexxenti jeħtieġ li jdaħħal il-filtru ta 'eċitazzjoni meħtieġ / splitter tar-raġġ ta' kulur doppju / inserzjonijiet tal-filtri li jimblokkaw fis-slots fil-mogħdija ottika.
3. Osserva b'lenti ta 'ingrandiment baxx, u aġġusta ċ-ċentru tas-sors tad-dawl sabiex ikun jinsab fiċ-ċentru tal-post kollu tal-illuminazzjoni skont l-apparat ta' aġġustament ta 'mudelli differenti ta' mikroskopji fluworexxenti.
4. Poġġi l-biċċa tal-kampjun u osserva wara li tiffoka. Għandha tingħata attenzjoni waqt l-użu: tosservax direttament mal-filtru tat-tarf, sabiex ma tikkawżax ħsara lill-għajnejn; meta tosserva kampjuni b'lenti taż-żejt, trid tuża lenti speċjali taż-żejt mingħajr fluworexxenza; wara li l-lampa tal-merkurju ta 'pressjoni għolja tintefa, ma tistax terġa' tinxtegħel immedjatament, jeħtieġ li tiġi ttestjata. Jista 'jerġa' jinbeda wara 5 minuti, inkella jkun instabbli u jaffettwa l-ħajja tal-lampa tal-merkurju.
(3) Osservazzjoni Bl-użu ta 'filtru tad-dawl blu-vjola taħt mikroskopju fluworexxenti fuq il-pjattaforma tat-tagħlim, wieħed jista' jara li l-o. 01 fil-mija taċ-ċelloli mtebbgħin b'żebgħa fluworexxenti oranġjo acridine, in-nukleu u ċ-ċitoplasma huma eċċitati biex jipproduċu żewġ kuluri differenti ta 'fluworexxenza (aħdar skur u aħmar oranġjo).
