Rekwiżiti għall-preparazzjoni ta' kampjuni ta' rutina għall-mikroskopija
Il-mikroskopju konfokali huwa prodott ġdid ta 'teknoloġija għolja li jagħmel epoka żviluppat fis-snin tmenin, u huwa wieħed mill-istrumenti analitiċi importanti fil-bijoloġija molekulari u fix-xjenza tal-ħajja llum. Il-mikroskopija konfokali hija bbażata fuq immaġini ta 'mikroskopju fluworexxenti b'apparat ta' skannjar bil-lejżer miżjud, bl-użu ta 'kompjuter għall-ipproċessar ta' l-immaġni biex jinkisbu stampi fluworexxenti tal-mikrostruttura ġewwa ċelloli jew tessuti, u biex josservaw bidliet fil-morfoloġija ta 'ħafna magni tas-sinjali fiżjoloġiċi fil-livell subċellulari. Issir għodda ta 'riċerka qawwija fl-oqsma tal-morfoloġija, bijoloġija taċ-ċelluli molekulari, newroxjenza, farmakoloġija, ġenetika u oqsma xjentifiċi oħra.
Il-preparazzjoni tal-kampjun għall-mikroskopija konfokali hija pass kritiku qabel l-iskoperta. Il-kampjuni jeħtieġ li jiġu ttikkettjati b'sondi fluworexxenti (singoli, doppji, tripli).
il
Il-kampjuni jistgħu jkunu tessuti fissi jew ħajjin, jew kulturi aderenti fissi jew ħajjin. Iċ-ċelloli għandhom jiġu kkultivati fuq platti jew coverslips speċjali tal-kultura Confocal. Issospendi ċ-ċelloli, ħawwad jew qatra slices, u għatti b'coverslips cover film. Il-ħxuna Zda tal-kampjun hija ta 'madwar 1 ~ 2mm, il-ħxuna tal-ħġieġ ta' kopertura użata għandha tkun inqas minn 0.17mm, u l-ħxuna tal-ħġieġ slide għandha tkun bejn 0.8 ~ 1.2 mm, u l-wiċċ huwa lixx, il-ħxuna hija uniformi, u m'hemm l-ebda fluworexxenza ta 'interferenza ovvja. Il-medja tal-immuntar spiss tintuża għal kampjuni fissi, u l-gliċerol ippreparat f'PBS b'pH ta '8. 5-9 huwa komunement użat għall-immuntar.
Rekwiżiti ta' rutina tal-preparazzjoni tal-kampjuni:
1. Għażla taż-żebgħa
Peress li l-mikroskopju konfokali juża laser ta 'wavelength wieħed bħala s-sors tad-dawl, l-għażla ta' żebgħa fluworexxenti għandha tkun ibbażata fuq il-wavelength tal-laser mgħammar bil-mikroskopju konfokali. Jekk ikun hemm żebgħat fluworexxenti multipli fl-istess kampjun, il-wavelength tal-emissjoni tagħhom għandu jitqies ukoll kemm jista 'jkun. Tikkoinċidix biex tevita problemi ta 'cross-color.
2. Għażla tat-trasportatur tal-kampjun
Ġeneralment, il-lenti oġġettiva ta 'qawwa għolja tal-mikroskopju konfokali hija lenti taż-żejt, l-apertura numerika tagħha hija żgħira, u d-distanza tax-xogħol bejn il-lenti u l-kampjun hija meħtieġa li ma tkunx aktar minn 0.17mm. Slajds u coverslips huma tajbin. Jekk tkun ċelluli sospiżi jew partiċelli sospiżi, dixx petri ddedikat għal mikroskopju konfokali jista 'jintuża biex iġorr il-kampjun għall-osservazzjoni.
3. Għażla tal-mezz ta 'immuntar
Jekk il-kampjun jeħtieġ li jiġi osservat darba biss u l-fluworexxenza ma titfiex faċilment, tista 'tagħżel ċerta konċentrazzjoni ta' taħlita ta 'gliċerol biex tissiġilla l-pjastra. Jekk il-kampjun jeħtieġ li jitqiegħed għal perjodu ta 'żmien u jittieħed diversi drabi, għandu jintgħażel mezz ta' mmuntar ta 'tifi kontra l-fluworexxenza biex jitnaqqas it-telf ta' sinjali fluworexxenti.
