Rekwiżiti tal-Ħxuna tal-Mikroskopju Ottiku għal Slajds tal-Ħġieġ
Deidrazzjoni mikroskopika u Twaħħil tal-Kampjun: Minħabba ċentrifugazzjoni ripetuta, iċ-ċelloli jintilfu, għalhekk huwa aħjar li twaħħal iċ-ċelloli mal-wiċċ ta 'slajd tal-ħġieġ jew folja tal-plastik għall-mikroskopija ottika, sabiex iċ-ċelloli jiġu deidrati u mnixxfa flimkien mal-ħġieġ slide jew folja tal-plastik. Rekwiżiti għall-ħxuna ta 'slajds tal-ħġieġ fil-mikroskopija ottika Sabiex iċ-ċelluli jitwaħħlu ma' slides tal-ħġieġ jew folji tal-plastik, huwa meħtieġ li l-ewwel jitqiegħed saff ta 'film fuq slides tal-ħġieġ jew folji tal-plastik. Il-metodu tat-tqegħid tal-film huwa kif ġej:
(1) L-aktar metodu sempliċi għall-mikroskopija ottika huwa li jitqiegħed saff irqiq ta 'film formali tal-polivinil (formvar). Xarrab il-pjastri mnaddfa f'(0.5-1) fil-mija ta' soluzzjoni ta' polyvinyl chloroform formali. Wara li l-atmosfera tivolatizza, jidher film abjad fuq is-slajds. Ħawwad il-pjastri diversi drabi fil-kloroform biex il-film jinbidel. Irqiq u lest biex jintuża.
(2) Waqqa 0.1 latitudni poly-L-lysine (ħoll 1 mg poly-lysine f'1 ml ilma ffiltrat waqt il-preparazzjoni) fuq is-slajd tal-ħġieġ imnaddaf, u poġġih f'kaxxa tal-provvista 450C wara li l-qtar tiżvolġi . nixxef. Dan il-metodu huwa l-aħjar minħabba li l-poly-L-lysine huwa ċċarġjat b'mod pożittiv, li jippermetti li aktar ċelloli tal-wiċċ iċċarġjati b'mod negattiv iwaħħlu.
(3) Żid plażma u gliċerol ma' ilma distillat fil-proporzjon ta' (30--40) fil-mija u (3-5) fil-mija skont ir-rekwiżiti tal-mikroskopju ottiku għall-ħxuna tal-pjastra biex tifforma proteina tal-gliċerol soluzzjoni. Il-likwidu jintrema fuq il-pjastra tal-ħġieġ imnaddaf, jinfetaħ u jitnixxef taħt il-mikroskopju ottiku. Il-film tal-proteina mqiegħda huwa mgħaddas f'2 fil-mija glutaraldehyde biex jiffissa l-proteina, maħsul u mnixxef għal użu aktar tard. Qabel l-użu, il-plażma tinżel fuq il-film tal-proteina Agħmilha "attivata", laħlaħ b'buffer wara 30 minuta, u tista 'tiġi applikata direttament.
Iċ-ċelloli fissi u mnaddfa jsiru f'konċentrazzjoni xierqa ta 'sospensjoni taċ-ċelluli b'ilma ffiltrat taħt mikroskopju diġitali, u l-mikroskopju ottiku jitqiegħed fuq slide tal-ħġieġ jew folja tal-plastik li tkun ġiet mgħottija b'membrana, u mqiegħda f'kamra umda, baxxa. temperatura (40C) ambjent (30-120) minuti biex iċ-ċelluli jitwaħħlu mal-membrana. Uża pinzetta fina biex aqbad il-pjastra tal-ħġieġ u ħawwadha f'ilma distillat doppju nadif, u aħsel iċ-ċelloli mhux imwaħħla b'mikroskopju ottiku. Rekwiżiti għall-ħxuna tal-pjastri f'mikroskopji ottiċi Mikroskopji polarizzanti mbagħad jitqiegħdu malajr f'reċipjent mimli b'50 fil-mija aċetun (jew etanol). Il-proċess ta 'deidrazzjoni huwa li tpoġġi l-pjastri f'aċetun jew etanol b'konċentrazzjoni dejjem tiżdied kull 3 minuti, u l-mikroskopju ottiku jew iżżid kontinwament il-konċentrazzjoni tal-aġent tad-deidrazzjoni fil-kontenitur tal-ħġieġ tal-pjastra. Skont l-esperjenza tal-laboratorju tal-awtur, l-operazzjoni tal-aħħar hija aktar konvenjenti. Il-metodu speċifiku ta 'mikroskopija ottika jista' terda nofs l-aġent ta 'deidratazzjoni fil-kontenitur kull 3 minuti, u mbagħad żid ammont ugwali ta' aġent ta 'deidratazzjoni b'konċentrazzjoni ta' 100 fil-mija. Wara 5-6 operazzjonijiet, il-konċentrazzjoni tal-aġent ta 'deidratazzjoni fil-bastiment tal-prezz tal-mikroskopju tilħaq 'il fuq minn 0.5 fil-mija, u ċ-ċelloli huma deidratati b'suċċess. Wara t-tnixxif tal-punt kritiku, is-slajd tal-ħġieġ jew il-folja tal-plastik hija mwaħħla mal-moll tal-kampjun b'adeżiv konduttiv għall-kisi tal-metall. Hemm ukoll konvenjenzi għat-twaħħil ta 'ċelloli ma' membrani stabbiliti bit-tielet metodu. Mikroskopju ottiku jista 'hang iċ-ċelloli ffissati b'konċentrazzjoni baxxa ta' glutaraldehyde fuq il-film tal-proteina "attivat". Il-mikroskopju ottiku jeħtieġ li l-ħxuna tal-pjastra tal-ħġieġ titqiegħed għal 10 minuti, u l-pjastra tal-ħġieġ jew folja tal-plastik hija mxarrba f'2 fil-mija glutaraldehyde. Wara 30 minuta, laħlaħ b'ilma ddistillat doppju ffiltrat, u mbagħad iddeidrat, nixxef u iksi l-metall skond il-metodu ta 'hawn fuq.
