Mikroskopju mikrobijoloġiku għadd dirett
Prinċipju sperimentali
L-għadd dirett taħt mikroskopju bl-użu ta 'emoċitometru huwa metodu ta' għadd mikrobjali użat komunement. Il-vantaġġ ta 'dan il-metodu huwa li huwa intuwittiv u veloċi. Poġġi s-suspensjoni batterika dilwita b'mod xieraq (jew is-sospensjoni ta' l-ispori) fil-kamra ta' l-għadd bejn is-slajd u l-ħġieġ ta' l-għatu ta' l-emoċitometru, u għodd taħt il-mikroskopju. Peress li l-volum tal-kamra tal-għadd huwa ffissat (0.1mm2), jista 'jiġi kkonvertit fin-numru totali ta' mikro-organiżmi għal kull unità ta 'volum skond in-numru ta' mikro-organiżmi osservati taħt il-mikroskopju. Minħabba li dan il-metodu jgħodd is-somma ta 'batterji ħajjin u mejta, jissejjaħ ukoll il-metodu tal-għadd totali ta' batterji.
Emoċitometru huwa ġeneralment slide speċjali tal-ħġieġ li fuqu erba 'skanalaturi jiffurmaw tliet pjattaformi. Il-pjattaforma fin-nofs hija maqsuma f'żewġ nofsijiet permezz ta 'kanal orizzontali qasir. Grid hija mnaqqxa fuq il-pjattaforma fuq kull naħa. Kull grilja hija maqsuma f'disa' kwadri kbar. Il-kwadru kbir fin-nofs huwa l-kamra tal-għadd. Il-mikro-organiżmi jingħaddu fil-kamra tal-għadd.
L-iskala tal-kamra tal-għadd ġeneralment għandha żewġ speċifikazzjonijiet, waħda hija li kwadru kbir huwa maqsum f'16-il kwadru tan-nofs, u kull kwadru tan-nofs huwa maqsum f'25 kwadru żgħir (Figura Ⅷ-2); l-ieħor huwa kwadru kbir Il-kwadru huwa maqsum f'25 kwadru tan-nofs, u kull kwadru tan-nofs huwa maqsum f'16-il kwadru żgħir (Figura Ⅷ-1, C). Imma ma jimpurtax f'liema tip ta 'bord tal-għadd, in-numru ta' kwadri żgħar f'kull kwadru kbir huwa l-istess, jiġifieri 16 × 25=400 kwadri żgħar.
It-tul tal-ġenb ta 'kull kwadru kbir huwa 1 mm, u l-erja ta' kull kwadru kbir hija 1 mm2. Wara li l-ħġieġa tal-għata tkun mgħottija, l-għoli bejn il-ħġieġa slide u l-ħġieġa li tkopri huwa 0.1 mm, għalhekk il-volum tal-kamra tal-għadd huwa 0.1mm3.
Meta tgħodd, ġeneralment għodd in-numru totali ta 'batterji fil-ħames kwadri tan-nofs, imbagħad ikseb il-valur medju ta' kull kwadru tan-nofs, u mbagħad immoltiplika b'16 jew 25 biex tikseb in-numru totali ta 'batterji fi kwadru kbir, u mbagħad Ikkonverti għall- numru totali ta 'batterji f'soluzzjoni batterjali 1ml.
Tagħmir tal-laboratorju
Emoċitometru, mikroskopju, coverslip, kapillari sterili;
Materjali Sperimentali
Suspensjoni ta' Saccharomyces cerevisiae
Proċedura sperimentali (metodu ta' għadd dirett tal-mikroskopju mikrobjali)
1. dilwizzjoni
Iddilwa sew is-suspensjoni ta' Saccharomyces cerevisiae. Jekk is-soluzzjoni batterjali mhix ħoxna, m'għandhiex għalfejn tiġi dilwita.
2. Kamra tal-għadd mikroskopiku
Qabel ma żżid il-kampjuni, wettaq spezzjoni mikroskopika tal-kamra tal-għadd tal-pjanċa tal-għadd. Jekk ikun hemm ħmieġ, jeħtieġ li jitnaddaf qabel ma jingħadd.
3. żid kampjun
Għatti l-pjanċa tal-emoċitometru nadif u niexef b'għatu tal-ħġieġ, u mbagħad uża dropper sterili b'ħalq dejjaq biex twaqqa' qatra żgħira tas-soluzzjoni dilwita ta' Saccharomyces cerevisiae mit-tarf tal-ħġieġ tal-għatu (mhux wisq), sabiex is-soluzzjoni tal-batterja huwa qrib il-vojt tul il-vojt. Osmosis kapillari tidħol fil-kamra tal-għadd waħedha, u l-kamra tal-għadd ġenerali tista 'timtela b'likwidu batterjali. Oqgħod attent li ma jkollokx bżieżaq tal-arja.
4. mikroskopju għadd
Wara li tistrieħ għal 5 minuti, poġġi l-emoċitometru fuq l-istadju tal-mikroskopju, l-ewwel uża lenti ta 'qawwa baxxa biex issib il-post tal-kamra tal-għadd, u mbagħad taqleb għal lenti ta' qawwa għolja għall-għadd. Jekk jinstab li s-soluzzjoni batterjali hija oħxon wisq jew irqiq wisq qabel l-għadd, huwa meħtieġ li terġa 'taġġusta d-dilwizzjoni qabel l-għadd. Id-dilwizzjoni ġenerali tal-kampjun teħtieġ madwar
5-10 ċelloli huma adattati. Kull kamra tal-għadd tagħżel il-batterja f'5 gradilji tan-nofs (4 kantunieri fakultattivi u grilji ċentrali) għall-għadd. Il-batterji fuq il-linja tal-grilja ġeneralment jingħaddu biss fuq il-linji ta 'fuq u tal-lemin. Fil-każ ta 'jibża' tal-ħmira, meta d-daqs tal-ġisem tal-bud jilħaq nofs iċ-ċellula omm, għodd żewġ batterji. Għadd kampjun biex tikkalkula l-kontenut batterjali tal-kampjun mill-valuri magħduda fiż-żewġ kmamar tal-għadd.
5. Tindif tal-emoċitometru
Wara l-użu, laħlaħ il-pjanċa tal-għadd taċ-ċelluli tad-demm fuq il-faucet b'ġettijiet tal-ilma, aħsilhiex b'oġġetti iebsa, u nixxefha waħdek jew b'hair dryer wara l-ħasil. Eżami mikroskopiku, osserva jekk hemmx batterji residwi jew sedimenti oħra f'kull ċellula. Jekk ma jkunx nadif, għandu jinħasel ripetutament sakemm ikun nadif.
