Kejl tal-Kwantità Mikrobika - Metodu ta 'Għadd Dirett Mikroskopiku!
It-tkabbir ta 'popolazzjonijiet batterjali huwa kkaratterizzat minn żieda fin-numru ta' ċelloli jew żieda fil-materjal ċellulari. Hemm diversi metodi għall-kejl tan-numri taċ-ċelluli, inkluż għadd mikroskopiku dirett, għadd tal-pjanċi, turbometrija bi spettrofotometru, numru l-aktar probabbli MPN, u filtrazzjoni tal-membrana. Il-metodi għall-kejl tas-sustanzi ċellulari jinkludu l-kejl tal-piż niexef taċ-ċelluli, il-kejl tal-kontenut ta 'ċerti komponenti ta' ċelloli bħal nitroġenu, RNA u DNA, u kejl ta 'prodotti metaboliċi. Fil-qosor, hemm ħafna metodi għall-kejl tat-tkabbir mikrobjali, kull wieħed bil-vantaġġi u l-iżvantaġġi tiegħu stess, u l-għażla għandha tkun ibbażata fuq rekwiżiti speċifiċi fix-xogħol. Dan l-esperiment jintroduċi prinċipalment il-metodu ta 'għadd dirett tal-mikroskopju użat b'mod komuni fil-produzzjoni u xogħol ta' riċerka xjentifika.
Rekwiżiti għan
1. Iċċara l-prinċipju tal-użu ta 'bord tal-għadd taċ-ċelluli tad-demm għall-għadd.
2. Ikkontrolla l-metodu tal-użu ta 'bord tal-għadd taċ-ċelluli tad-demm għall-għadd tal-mikrobi.
2, Prinċipji Bażiċi
Il-metodu ta 'għadd dirett mikroskopiku huwa metodu sempliċi, veloċi u intuwittiv biex jgħodd direttament ammont żgħir ta' sospensjoni ta 'kampjun taħt mikroskopju billi jitqiegħed fuq slide speċjali tal-ħġieġ b'ċerta żona u volum (magħruf ukoll bħala counter batterjali). Fil-preżent, apparati għall-għadd tal-batterji użati b'mod komuni fid-dar u barra mill-pajjiż jinkludu pjanċi tal-għadd taċ-ċelluli tad-demm, apparati tal-għadd tal-batterji Peteroff Hauser, u apparati tal-għadd tal-batterji Hawksley, li kollha jistgħu jintużaw għall-għadd ta 'sospensjonijiet ta' ħmira, batterji, spori fungali, eċċ., bl-istess prinċipju bażiku. L-aħħar żewġ tipi ta 'counters batterjali għandhom volum totali ta' {{0}}.02mm3 wara li jkunu mgħottijin b'għatu tal-ħġieġ, u d-distanza bejn il-ħġieġa li tkopri u l-islajd tal-ġarr hija biss 0.02mm. Għalhekk, objettiv ta 'immersjoni taż-żejt jista' jintuża biex josserva u jgħodd ċelloli iżgħar bħal batterji. Minbarra l-użu ta 'dawn il-counters batterjali, hemm ukoll metodu ta' stima għall-osservazzjoni diretta tal-proporzjon ta 'żona ta' smear għal żona ta 'qasam taħt mikroskopju, li ġeneralment jintuża għal eżami batterjoloġiku tal-ħalib. Il-vantaġġi tal-għadd dirett b'mikroskopju huma intuwittivi, veloċi u faċli biex joperaw. Iżda l-iżvantaġġ ta 'dan il-metodu huwa li r-riżultati mkejla huma ġeneralment is-somma ta' ċelluli mejta u ħajjin. Fil-preżent, hemm xi metodi li jistgħu jegħlbu dan l-iżvantaġġ, bħall-kombinazzjoni tal-kultura tal-kamra tat-tbajja taċ-ċelluli ħajjin (ħin qasir) u żżid inibituri tad-diviżjoni taċ-ċelluli biex jintlaħaq l-għan li jingħaddu biss iċ-ċelloli ħajjin.
L-użu ta 'bord tal-għadd taċ-ċelluli tad-demm bħala eżempju għall-għadd dirett taħt mikroskopju. Il-metodi ta 'użu taż-żewġ counters tal-batterji l-oħra jistgħu jinstabu fil-manwali ta' diversi manifatturi. L-għadd dirett taħt mikroskopju bl-użu ta 'pjanċa tal-għadd taċ-ċelluli tad-demm huwa metodu użat komunement għall-għadd tal-mikrobi. Il-bord tal-għadd huwa slide tal-ħġieġ magħmul apposta b'erba 'skanalaturi li jiffurmaw tliet pjattaformi fuqha; Il-pjattaforma usa 'fin-nofs hija maqsuma f'żewġ nofsijiet minn kanal orizzontali qasir, u hemm grilja fuq kull naħa tal-pjattaforma. Kull gradilja hija maqsuma f'disa 'gradilji kbar, u l-gradilja kbira fin-nofs hija l-kamra tal-għadd. L-istruttura tal-pjanċa tal-għadd taċ-ċelluli tad-demm tidher fil-Figura l{{0}}. L-iskala tal-kamra tal-għadd ġeneralment għandha żewġ speċifikazzjonijiet. Waħda hija li kwadru kbir huwa maqsum f'25 kwadru tan-nofs, u kull kwadru huwa aktar maqsum f'16-il kwadru żgħir (Figura 15-2); Metodu ieħor huwa li taqsam kwadru kbir f'16-il kwadru tan-nofs, u kull kwadru huwa aktar maqsum f'25 kwadru żgħir. Madankollu, irrispettivament mid-daqs tal-bord tal-għadd, hemm 400 kwadri żgħar f'kull kwadru kbir. Jekk it-tul tal-ġenb ta 'kull kwadru huwa 1mm, l-erja ta' kull kwadru kbir hija lmm2. Wara li tkopri b'għatu tal-ħġieġ, l-għoli bejn il-ħġieġ tal-għata u s-slajd huwa 0.1mm, għalhekk il-volum tal-kamra tal-għadd huwa 0.1mm3 (elf ta 'millilitru). Figura 15-1 Struttura tal-Bord tal-Għadd taċ-Ċelloli tad-Demm (I) Figura 15-2 Struttura tal-Bord tal-Għodd taċ-Ċelloli tad-Demm (II) A Dehra ta' quddiem; B. Veduta tas-sezzjoni vertikali; Il-grilja mkabbra għandha kwadru kbir fin-nofs bħala l-kamra tal-għadd 1. Bord tal-għadd taċ-ċelluli tad-demm; 2. Għatti tal-ħġieġ; Meta tgħodd fil-kamra tal-għadd, l-għadd totali ta 'batterji huwa normalment ikkalkulat għal ħames kwadri, allura l-valur medju ta' kull kwadru jinkiseb, immultiplikat b'25 jew 16 biex jinkiseb l-għadd totali ta 'batterji fi kwadru kbir, li mbagħad jiġi kkonvertit fil- għadd totali ta' batterji fis-soluzzjoni batterjali lml. Jekk wieħed jassumi li l-għadd totali ta 'batterji f'ħames grilji kwadri huwa A u l-fattur ta' dilwizzjoni tas-soluzzjoni batterjali huwa B. Jekk hemm 25 pjanċi tal-għadd fil-gradilja kwadra, l-għadd totali ta 'batterji f'1mL ta' soluzzjoni batterjali huwa A / 5 × 25 × 104 × B=50000A · B. Bl-istess mod, jekk hemm 16-il pjanċi tal-għadd fil-gradilja kwadra, l-għadd totali ta’ batterji f’1mL ta’ soluzzjoni batterjali huwa A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
