Laser Confocal Microscopy - Karatteristiċi u Applikazzjonijiet
Laser scanning confocal microscopy (LSCM) hija tip ta 'mikroskopju ddisinjat ibbażat fuq teknoloġija ta' fokus konjugat, jiġifieri, is-sors tad-dawl tal-lejżer, il-kampjun li għandu jitkejjel, u d-ditekter huma kollha f'pożizzjonijiet konjugati ma 'xulxin.
Fundamentali
F'mikroskopju ġenerali, il-pjan ta 'l-immaġini ta' l-osservazzjoni huwa iżolat mill-pjan axjali maġenb billi jikkoinċidi l-pjan fokali tal-lenti oġġettiva mad-ditekter, filwaqt li f'mikroskopju konfokali, jintuża spot tad-dawl limitat mid-diffrazzjoni biex iddawwal il-kampjun u A pinhole jintuża fil-mogħdija tad-dawl miġbura fil-fokus konjugat tal-post tad-dawl biex tiffiltra d-dawl mitluf biex toħloq dan l-effett ta 'iżolament u b'hekk ittejjeb ir-riżoluzzjoni.
Karatteristiċi tal-immaġini
Sezzjoni ottika scanning immaġini
Karatteristika oħra tal-mikroskopija konfokali tal-iskannjar bil-lejżer hija li hija teknoloġija tal-immaġini tal-iskannjar. It-teknoloġija ta 'illuminazzjoni ta' kamp wiesa 'tradizzjonali ddawwal il-kampjun kollu, sabiex l-immaġni tista' tinqabad direttament mill-għajn jew ditekter, iżda LSCM juża raġġ jew travi ffukati Multipli jgħaddu mill-kampjun biex tiskennja u tistampa. L-immaġni li tirriżulta tissejjaħ sezzjoni ottika. Dan li ġej juri d-differenza bejn il-metodu tradizzjonali ta 'illuminazzjoni ta' kamp wiesa 'u l-metodu ta' illuminazzjoni konfokali tal-iskannjar bil-lejżer.
Għalhekk, metodu ta 'ħidma attwali ta' mikroskopju konfokali modern huwa kif muri fil-figura hawn taħt. Id-dawl ta 'eċitazzjoni li joħroġ mill-lejżer jgħaddi minn mera dikrojka u jiġi skennjat fid-direzzjoni x u d-direzzjoni y tal-kampjun permezz ta' par galvanometri. L-eċitazzjoni (jew ir-riflessjoni) tal-kampjun hija Id-dawl jidħol fid-ditekter PMT permezz tal-pinhole u jiġi rreġistrat, u l-immaġni skannjata rreġistrata hija rikostitwita minn kompjuter biex tibni mill-ġdid l-immaġni tal-kampjun attwali.
Iġġenera immaġini "z-stack" fuq pjani fokali differenti
Id-dawl rifless lura biss mis-saff tal-kampjun konjugat jista 'jgħaddi mit-toqba żgħira fil-mogħdija tad-dawl tal-ġbir, u r-riflessjonijiet tas-saff tal-kampjun irrilevanti li fadal huma mblukkati mit-toqba żgħira. Dan jista' jirriżulta f'titjib sinifikanti fir-riżoluzzjoni. Paragun ġenb ma 'ġenb ta' mikroskopija ta 'fluworexxenza multidimensjonali u mikroskopija konfokali ta' l-istess kampjun oħxon. Meta jittieħdu serje ta 'immaġini fi pjani fokali differenti, jistgħu jiġu ġġenerati immaġini komunement imsejħa "z-stacks", li juru r-riżoluzzjoni u l-gwadann tal-kuntrast offruti mill-mikroskopija konfokali u l-kawżi sottostanti ta' dawn il-qligħ. Jista 'jidher li l-eżaminazzjoni tal-immaġni fil-quċċata tal-munzell bil-pjan tal-immaġini 'l fuq mit-tessut jiżvela ammont kbir ta' dawl imxerred fl-immaġni tal-fluworexxenza, filwaqt li l-immaġni tal-mikroskopija konfokali tidher sewda. Dan it-tnaqqis fil-PSF assjali jirriżulta direttament fid-differenza tar-riżoluzzjoni osservata fl-interface ottika fin-nofs tal-munzell z.
Ir-riżoluzzjoni hija mtejba ħafna meta mqabbla mad-dawl widefield
Fil-mikroskopija tal-fluworexxenza, l-intensità tad-dawl emessa minn punt wieħed hija deskritta mill-funzjoni tal-firxa tal-punt (PSF), u l-mudell tagħha huwa diska Airy. Ir-riżoluzzjoni tas-sistema ta 'fluworexxenza tista' tiġi deskritta mir-raġġ tad-diska Airy, li tista 'tiġi deskritta minn L-apertura numerika tal-lenti oġġettiva u l-wavelength tad-dawl ta' eċċitazzjoni jiddeterminaw
