Għarfien relatat mal-mikroskopija tal-fluworexxenza konfokali
Il-prinċipju bażiku tal-mikroskopija tal-fluworexxenza konfokali huwa li tuża sors ta 'dawl punt biex irradja l-kampjun, li jifforma post żgħir definit tajjeb fuq il-pjan fokali. Il-fluworexxenza emessa mill-post wara l-irradjazzjoni tinġabar mil-lenti oġġettiva u tintbagħat lura lill-ispettrofotometru magħmul minn mera tal-kulur bidirezzjonali tul il-mogħdija oriġinali tal-irradjazzjoni. L-ispettrofotometru jibgħat fluworexxenza direttament lid-ditekter. Hemm żewġ pinholes quddiem is-sors tad-dawl u d-ditekter, rispettivament imsejħa pinholes ta 'illuminazzjoni u pinholes ta' skoperta. Id-dimensjonijiet ġeometriċi tat-tnejn huma konsistenti, madwar 100-200nm; Meta mqabbel mal-punt tad-dawl fuq il-pjan fokali, it-tnejn huma konjugati, li jfisser li l-punt tad-dawl jgħaddi minn serje ta 'lentijiet u fl-aħħar mill-aħħar jista' jiffoka kemm fuq il-pinhole tal-illuminazzjoni kif ukoll fuq il-pinhole ta 'skoperta simultanjament. B'dan il-mod, id-dawl mill-pjan fokali jista 'jikkonverġi fil-medda tat-toqba ta' skoperta, filwaqt li dawl imxerred minn fuq jew taħt il-pjan fokali huwa mblukkat barra mit-toqba ta 'skoperta u ma jistax jiġi immaġni. Billi tiskennja l-kampjun punt b'punt b'lejżer, it-tubu fotomultiplikatur wara li jiskopri l-pinhole jikseb ukoll l-immaġni konfokali korrispondenti tal-punt tad-dawl punt b'punt, li huwa kkonvertit f'sinjal diġitali u trasmess lill-kompjuter. Fl-aħħarnett, immaġni konfokali ċara tal-pjan fokali kollu hija sintetizzata fuq l-iskrin.
Kull immaġni tal-pjan fokali hija fil-fatt cross-section ottika tal-kampjun, li dejjem għandha ċerta ħxuna, magħrufa wkoll bħala sezzjoni rqiqa ottika. Minħabba l-fatt li l-intensità tad-dawl fil-punt fokali hija ħafna akbar minn dik fil-punt mhux fokali, u d-dawl tal-pjan mhux fokali huwa ffiltrat minn pinholes, il-fond tal-kamp tas-sistema confocal huwa bejn wieħed u ieħor żero. L-iskannjar tul id-direzzjoni tal-assi Z jista 'jikseb tomografija ottika, li tifforma porzjon ottiku bidimensjonali fil-post fokali tal-kampjun osservat. Billi tgħaqqad l-iskannjar tal-pjan XY (pjan fokali) ma 'l-iskannjar tal-assi Z (assi ottiku), tista' tinkiseb immaġni tridimensjonali tal-kampjun billi takkumula saffi kontinwi ta 'immaġini bidimensjonali u tipproċessahom b'softwer tal-kompjuter speċjalizzat.
Il-pinhole ta 'skoperta u l-pinhole tas-sors tad-dawl huma dejjem iffukati fuq l-istess punt, sabiex il-fluworexxenza eċċitati barra l-pjan li jiffoka ma tistax tidħol fil-pinhole ta' skoperta.
L-espressjoni sempliċi tal-prinċipju tax-xogħol tal-mikroskopija konfokali tal-lejżer hija li tuża laser bħala s-sors tad-dawl, u żżid apparat tal-iskannjar tal-lejżer u apparat li jiffoka konjugat fuq il-bażi tal-immaġni tal-mikroskopija tal-fluworexxenza tradizzjonali. Hija sistema kkontrollata minn kompjuter għall-akkwist u l-ipproċessar ta 'immaġni diġitali.
