Għarfien dwar il-Mikroskopija ta' Fluworexxenza ta' Żewġ-Photon
Il-prinċipju bażiku ta' eċitazzjoni ta' żewġ-fotoni huwa li f'densità għolja ta' fotoni, molekuli fluworexxenti jistgħu simultanjament jassorbu żewġ fotoni ta' wavelength twal u jarmu foton ta' wavelength iqsar wara perjodu qasir ta' hekk-imsejjaħ ħajja ta' stat eċċitati; L-effett huwa l-istess bħall-użu ta 'foton b'nofs il-wavelength tal-wavelength twil biex teċita molekuli fluworexxenti. Eċitazzjoni ta' żewġ fotoni teħtieġ densità għolja ta' fotoni, u sabiex tiġi evitata l-ħsara taċ-ċelluli, mikroskopija ta' żewġ-fotoni tuża lejżers tal-polz imsakkra b'mod ta'-enerġija-għoli. Il-lejżer emess minn dan il-laser għandu enerġija massima għolja u enerġija medja baxxa, b'wisa 'tal-polz ta' 100 femtoseconds biss u frekwenza ta 'sa 80 sa 100 megahertz. Meta tuża lenti oġġettiva b'apertura numerika għolja biex tiffoka l-fotoni ta' lejżer pulsat, id-densità tal-fotoni fil-punt fokali tal-lenti oġġettiva hija l-ogħla, u l-eċitazzjoni ta' żewġ-fotoni sseħħ biss fil-punt fokali tal-lenti oġġettiva. Għalhekk, il-mikroskopju b'żewġ-fotoni ma jeħtieġx pinhole konfokali, li jtejjeb l-effiċjenza tas-sejbien tal-fluworexxenza.
Fil-fenomeni ta 'fluworexxenza ġenerali, minħabba d-densità baxxa tal-foton tad-dawl ta' eċċitazzjoni, molekula fluworexxenti tista 'biss tassorbi foton wieħed kull darba u mbagħad temetti foton fluworexxenti ieħor permezz ta' transizzjoni radjattiva, li hija magħrufa bħala fluworexxenza foton waħda. Għal proċessi ta' eċċitazzjoni tal-fluworexxenza li jużaw lejżers bħala sorsi tad-dawl, jistgħu jseħħu żewġ-fenomeni ta' fluworexxenza fotoni jew saħansitra multifoton. F'dan il-każ, is-sors tad-dawl ta 'eċitazzjoni użat għandu intensità għolja u densità tal-fotoni li tissodisfa r-rekwiżit għal molekuli fluworexxenti biex jassorbu żewġ fotoni simultanjament. Fil-proċess ta 'użu ta' laser ġenerali bħala s-sors tad-dawl ta 'eċitazzjoni, id-densità tal-fotoni għadha insuffiċjenti biex tipproduċi fenomenu ta' assorbiment ta 'żewġ -fotoni. Tipikament, jintużaw lejżers tal-polz femtosecond, b'qawwa istantanja li tilħaq il-livell tal-megawatt. Għalhekk, il-wavelength ta 'żewġ -fluworexxenza fotoni huwa iqsar minn dak tad-dawl ta' eċċitazzjoni, ekwivalenti għall-effett prodott minn nofs eċċitazzjoni wavelength eċċitazzjoni.
