Introduzzjoni għall-Mikroskopija tal-Fluworexxenza
Il-mikroskopija tal-fluworexxenza hija li tirradja l-oġġett imtebba 'b'fluworexxeina b'dawl ta' tul ta 'mewġ qasir, sabiex tkun eċċitata li tipproduċi fluworexxenza ta' tul ta 'mewġ twil, u mbagħad osservata. F'mikroskopju fluworexxenti, id-dawl ta 'eċitazzjoni ta' wavelength speċifiku għandu jintgħażel mid-dawl ta 'illuminazzjoni tal-kampjun biex jiġġenera fluworexxenza, u mbagħad il-fluworexxenza għandha tkun separata mid-dawl imħallat tad-dawl ta' eċċitazzjoni u fluworexxenza għall-osservazzjoni. Għalhekk, is-sistema tal-filtru għandha rwol estremament importanti fl-għażla ta 'wavelength speċifiku. Il-mikroskopji tal-fluworexxenza jintużaw ħafna fil-bijoloġija, il-mediċina u oqsma oħra.
1. Il-komponenti ewlenin tal-mikroskopju fluworexxenti:
(A) Sors tad-dawl: Is-sors tad-dawl jirradja dawl ta 'wavelengths varji (minn ultravjola għal infra-aħmar). il
(B) Sors tad-dawl tal-filtru tal-eċċitazzjoni: permezz tad-dawl ta 'wavelength speċifiku li jista' jikkawża li l-kampjun jipproduċi fluworexxenza, filwaqt li jimblokka dawl li huwa inutli għal fluworexxenza eċċitanti. il
(C) Kampjuni fluworexxenti: ġeneralment imtebba 'b'pigmenti fluworexxenti. il
(D) Filtru ta 'l-imblukkar: imblokka d-dawl ta' eċċitazzjoni li mhux assorbit mill-kampjun u jittrasmetti b'mod selettiv il-fluworexxenza, u xi wavelengths huma trasmessi b'mod selettiv fil-fluworexxenza.
il
2. Klassifikazzjoni tal-mikroskopji fluworexxenti:
Mikroskopji fluworexxenti huma ġeneralment maqsuma f'żewġ tipi: trasmissjoni u epi-emissjoni:
a. Tip ta 'trażmissjoni: id-dawl ta' eċċitazzjoni ġej mill-qiegħ tal-oġġett li jrid jiġi spezzjonat, u l-kondensatur huwa kondensatur ta 'kamp skur, sabiex id-dawl ta' eċċitazzjoni ma jidħolx fil-lenti oġġettiva, iżda l-fluworexxenza tidħol fil-lenti oġġettiva. Huwa qawwi f'ingrandimenti baxxi, iżda skur f'ingrandimenti għoljin. Huwa diffiċli li topera fl-immersjoni taż-żejt u ċ-ċentru. Huwa speċjalment diffiċli li tiddetermina l-firxa tad-dawl f'ingrandimenti baxxi, iżda tista 'tikseb sfond ta' kamp viżiv skur ħafna. It-tip ta 'trasmissjoni ma jintużax għal oġġetti mhux trasparenti. il
b. Epi-tip: It-tip ta 'trasmissjoni huwa kważi eliminat fil-preżent. Ħafna mill-mikroskopji fluworexxenti ġodda huma tat-tip epi. Is-sors tad-dawl jiġi minn fuq l-oġġett li jrid jiġi spezzjonat, u hemm splitter tar-raġġ fil-mogħdija ottika, għalhekk huwa adattat kemm għal oġġetti trasparenti kif ukoll opaki li għandhom jiġu spezzjonati. Peress li l-lenti oġġettiva taġixxi bħala lenti tal-kondensatur, mhux biss huwa faċli li topera, iżda wkoll tista 'tikseb illuminazzjoni uniformi tal-kamp viżiv kollu minn ingrandiment baxx għal ingrandiment għoli. il
il
3. Prekawzjonijiet għall-Fluworoskopija
a. L-irradjazzjoni fit-tul tad-dawl ta 'eċitazzjoni se tikkawża attenwazzjoni u tkessiħ tal-fluworexxenza, għalhekk tqassar il-ħin ta' osservazzjoni kemm jista 'jkun, u uża baffle biex tkopri d-dawl ta' eċċitazzjoni meta ma tosservax temporanjament. il
b. Meta tosserva b'lenti ta 'immersjoni taż-żejt, uża "żejt mhux fluworexxenti". il
c. Il-fluworexxenza hija kważi dejjem dgħajfa u għandha titwettaq f'kamra mudlama. il
d. L-aħjar huwa li tinstalla stabilizzatur tal-vultaġġ fil-provvista tal-enerġija, inkella l-vultaġġ instabbli mhux biss inaqqas il-ħajja tal-lampa tal-merkurju, iżda jaffettwa wkoll l-effett tal-ispezzjoni tal-mikroskopju. il
il
4. Użu ta 'Mikroskopija Fluworexxenti
1. Rekwiżiti ta 'preparazzjoni għal kampjuni ta' mikroskopju fluworexxenti
a. Slide tal-ħġieġ
Il-ħxuna tal-pjastra tal-ħġieġ għandha tkun bejn 0.8 u 1.2mm. Slide li hija ħoxna wisq se tassorbi aktar dawl minn naħa waħda, u min-naħa l-oħra, id-dawl ta 'eċċitazzjoni ma jistax jiġi kkonċentrat fuq il-kampjun. Slajds għandhom ikunu lixxi, uniformi fil-ħxuna, u ħielsa minn awtofluworexxenza ovvja. Xi drabi jintużaw slides tal-ħġieġ tal-kwarz. il
b. Għatti tal-ħġieġ
Il-ħxuna tal-ħġieġa li tkopri hija ta 'madwar 0.17mm, lixxa. Sabiex tissaħħaħ id-dawl ta 'eċitazzjoni, tista' tintuża wkoll ħġieġa ta 'kopertura niexfa, li hija ħġieġa ta' kopertura speċjali miksija b'diversi saffi ta 'sustanzi (bħal fluworidu tal-manjeżju) li għandhom effetti ta' interferenza differenti fuq dawl ta 'tul ta' mewġ differenti, li jista 'jagħmel il- fluworexxenza tmur bla xkiel. Id-dawl ta 'eċċitazzjoni jgħaddi minnu, u d-dawl ta' eċċitazzjoni rifless jeċita l-kampjun. il
c. Kampjun
Flieli tat-tessuti jew kampjuni oħra m'għandhomx ikunu ħoxnin wisq. Jekk tkun ħoxna wisq, il-biċċa l-kbira tad-dawl ta 'eċitazzjoni se jiġi kkunsmat fil-parti t'isfel tal-kampjun, filwaqt li l-parti ta' fuq osservata direttament mil-lenti oġġettiva ma tistax tiġi eċċitata bis-sħiħ. Barra minn hekk, il-koinċidenza taċ-ċelluli jew l-impuritajiet ikopru, li jaffettwaw is-sentenza. il
d. Aġent tal-immuntar
Il-gliċerina tintuża komunement bħala aġent ta 'immuntar, li m'għandux ikollu awtofluworexxenza, bla kulur u trasparenti, u l-luminożità tal-fluworexxenza hija isbaħ f'pH 8.5-9.5, u mhuwiex faċli li fade malajr. Għalhekk, taħlita ugwali ta 'gliċerol u 0.5mol/L soluzzjoni buffer karbonat b'pH ta' 9.0 sa 9.5 tintuża komunement bħala aġent ta 'immuntar. il
e. żejt tal-mera
Ġeneralment, iż-żejt tal-immersjoni għandu jintuża meta jiġu osservati kampjuni b'mikroskopji fluworexxenti ta 'kamp skur u għanijiet ta' immersjoni taż-żejt. L-aħjar huwa li tuża żejt speċjali tal-mera mhux fluworexxenti, li jista 'wkoll jiġi sostitwit bil-gliċerina msemmija hawn fuq, u paraffin likwida tista' tintuża wkoll, iżda l-indiċi refrattiv huwa baxx, li jaffettwa xi ftit il-kwalità tal-immaġni.
