Kemm Taf Dwar il-Mikroskopija tal-Fluworexxenza
Mikroskopji fluworexxenti ġeneralment jużaw lampi tal-merkurju ta 'intensità għolja bħala sorsi tad-dawl ta' eċċitazzjoni. Il-filtri jintużaw biex jiffiltraw id-dawl mhux mixtieq, u jħallu biss id-dawl pur ta 'intensità għolja li jħeġġeġ il-fluworofor. Wara li d-dawl monokromatiku irradja l-kampjun permezz tal-lenti oġġettiva, il-kampjun ikun eċċitati biex jarmu dawl (fluworexxenza), u kemm il-fluworexxenza kif ukoll id-dawl ta 'eċċitazzjoni se jerġgħu lura tul il-mogħdija ottika tal-lenti oġġettiva. F'dan il-każ, hija meħtieġa mera dikroika biex tiffiltra d-dawl ta 'eċitazzjoni. , inħallu biss il-fluworexxenza li għandna bżonn naraw.
Din il-fluworexxenza tilħaq l-ocular tul il-mogħdija tad-dawl tal-mikroskopju, u mbagħad tidħol fl-għajnejn tagħna, fejn nistgħu naraw il-fluworexxenza emessa mill-fluworophore.
Iċċekkja minn qabel u aġġustament tal-mikroskopju fluworexxenti:
(1) Qabel kull osservazzjoni tal-fluworexxenza, huwa meħtieġ li tiċċekkja regolarment l-allinjament tal-filament, il-fokus tal-passaġġ ottiku, id-dijaframma tal-apertura, u l-issettjar tad-dijaframma tal-kamp tal-apparat tal-fluworexxenza.
(2) Jekk l-assemblaġġ tal-filtru tal-eċitazzjoni/emissjoni tal-fluworexxenza meħtieġ ġiex installat fil-konvertitur, kemm jekk il-lenti tal-objettiv tal-mikroskopju tal-fluworexxenza hijiex ikkonfigurata sew, u neħħi t-tbajja taż-żejt u t-trab fuq il-lenti ta 'quddiem tal-lenti tal-objettiv.
(3) Jekk l-osservazzjoni tal-kuntrast tal-fażi tad-dawl trażmess titwettaq fl-istess ħin, huwa meħtieġ li tiċċekkja l-konjugazzjoni taċ-ċentru tal-kondensatur u ċ-ċirku tal-kuntrast tal-fażi oppost għal-lenti oġġettiva.
(4) Iċċekkja jekk it-trasportatur tal-kampjun (ħġieġ li jiżżerżaq, ħġieġ ta 'kopertura u utensili oħra) huwiex miksi b'likwidu jew trab, u jekk il-ħxuna hijiex fil-medda tad-distanza ta' ħidma kalibrata tal-lenti oġġettiva. Il-kampjun imqatta' m'għandux ikun oħxon wisq, preferibbilment Inqas minn jew ugwali għal 10 μm.
(5) Minħabba li s-sors tad-dawl fih raġġi ultravjola, pjanċa tal-ilqugħ tad-dawl kannella titqiegħed fuq in-naħa ta 'quddiem tal-istadju biex tevita li r-raġġi ultravjola jagħmlu ħsara lir-retina.
(6) L-instabilità tal-vultaġġ se tnaqqas il-ħajja tas-servizz tal-lampa tal-merkurju bi pressjoni għolja, u l-provvista tal-enerġija tas-sors tad-dawl hija mgħammra bi stabilizzatur tal-vultaġġ.
(7) Sabiex tittawwal il-ħajja tal-lampa tal-merkurju, tista 'titfi 15-il minuta wara li tinxtegħel; ladarba l-qawwa fluworexxenti tal-lampa tal-merkurju tintefa, jeħtieġ li tistenna mill-inqas 10 minuti biex terġa 'tibda l-fwar tal-merkurju biex jiksaħ u terġa' lura għall-istat oriġinali, inkella l-ħajja tal-lampa tkun affettwata.
Osservazzjoni ta' l-immaġini bil-mikroskopju fluworexxenti:
(1) Madwar 5-10 minuti wara li jinxtegħel is-sors tad-dawl fluworexxenti, l-intensità tad-dawl ta 'eċitazzjoni għandha tendenza li tkun stabbli, u l-kampjun jitgħabba għall-osservazzjoni; sabiex jiġi evitat it-tifi tal-fluworexxenza tal-kampjun ikkawżat minn dawl ta 'eċċitazzjoni eċċessiv matul il-proċess ta' ffukar u tfittxija ta 'oġġetti, l-ewwel żżom il-mikroskopju tal-fluworexxenza Aġġusta d-dawl ta' eċċitazzjoni għal intensità moderata b'dijaframma tal-apertura jew żid filtru ND, u mexxi l-istadju tal-kampjun regolarment. Wara li tikkonferma l-immaġni tal-mera, aġġusta għall-istat fluworexxenti għall-isparar u r-reġistrazzjoni.
(2) Aġġustamenti għal kwalità fqira tal-immaġni. Minbarra l-fatturi tal-preparazzjoni tal-kampjuni, l-aġġustamenti meħtieġa li jistgħu jsiru huma:
① Eskludi apparati li jillimitaw id-dawl jew li jillimitaw id-dawl fil-mogħdija ottika tal-immaġini, bħal aċċessorji DIC, filtri ND, eċċ.
②Aġġusta mill-ġdid il-fokus tar-riċevitur u d-daqs tad-dijaframma tal-apertura tal-mikroskopju fluworexxenti.
③ Aġġusta bir-reqqa ċ-ċirku ta 'korrezzjoni tad-differenza tal-kopertura tal-lenti oġġettiva tal-mikroskopju fluworexxenti.
Punti ta' Applikazzjoni ta' Mikroskopija ta' Fluworexxenza
Il-mikroskopija tal-fluworexxenza tuża immaġini ta '"fluworexxenza attinika". Jekk il-wavelength ta 'eċitazzjoni magħżula tkun fir-reġjun qrib ultravjola (320-400nm), li huwa inviżibbli għall-għajn, l-ispettru ta' emissjoni ta 'fluworexxenza huwa wkoll iqsar mill-wavelength medju ta' sorsi tad-dawl ordinarji tal-mera tad-dawl. ittejjeb. Fotoni ta 'enerġija għolja jaħbtu mal-elettroni, u jikkawżaw l-elettroni li jgħaddu mill-istat bażi għall-istat eċċitati. L-elettroni fl-istat eċċitati huma instabbli ħafna u se jaqgħu lura għall-istat bażiku. F'dan il-proċess, parti mill-enerġija termali se tiġi kkunsmata u se jiġu emessi fotoni ġodda. Il-foton il-ġdid għandu enerġija aktar baxxa mill-foton oriġinali u għalhekk għandu wavelength itwal. Peress li l-wavelength tal-foton il-ġdid huwa differenti mill-wavelength tal-foton tad-dawl inċidentali, iż-żewġ raġġi ta 'dawl b'wavelengths differenti huma separati b'ċertu metodu ta' pproċessar ottiku, sabiex naraw biss il-fotoni ġodda emessi (sinjal ta 'fluworexxenza), jiġifieri, il-mikroskopju fluworexxenti jara immaġini fluworexxenti.
