Osservazzjoni tal-fluworexxenza tal-mikroskopju ottiku
Il-fluworexxenza tirreferi għall-proċess li fih sustanza fluworexxenti temetti dawl b'wavelength itwal kważi simultanjament meta tiġi irradjata b'dawl ta 'wavelength speċifiku (Figura 1). Meta dawl ta 'wavelength speċifiku (eċċitazzjoni wavelength) jolqot molekula, bħal dawk f'fluworophore, l-enerġija foton hija assorbita mill-elettroni tal-molekula. Sussegwentement, it-tranżizzjoni tal-elettroni mill-istat fundamentali (S0) għal livell ogħla ta 'enerġija, l-istat eċċitati (S1'). Dan il-proċess jissejjaħ eċċitazzjoni①. L-elettron jibqa' fl-istat eċċitati għal 10-9–{10-8 sekondi, li matulhom l-elettron jitlef xi enerġija②. Matul il-proċess ta 'elettroni li jħallu l-istat eċċitati (S1) u jirritornaw għall-istat ta' l-art③, l-enerġija li jifdal assorbita matul il-proċess ta 'eċċitazzjoni hija rilaxxata.
Dijagramma Jablonski fluworexxenti
Il-ħin ta 'residenza tal-molekula fluworexxenti fl-istat eċċitati huwa l-ħajja tal-fluworexxenza, li ġeneralment tkun fuq il-livell nanosecond, u hija karatteristika inerenti tal-molekula fluworexxenti nnifisha. Fluorescence Lifetime Imaging (FLIM), li juża teknoloġija ta 'l-immaġini ta' fluworexxenza tul il-ħajja, jista 'jwettaq kejl funzjonali aktar fil-fond flimkien ma' immaġini ta 'intensità ta' fluworexxenza, u jikseb konformazzjoni molekulari, interazzjonijiet intermolekulari, u l-mikroambjent ta 'molekuli, eċċ Informazzjoni li hija diffiċli biex tikseb b'immaġini ottiċi konvenzjonali.
Proprjetà importanti oħra tal-fluworexxenza hija ċ-ċaqliq Stokes, id-differenza tal-wavelength bejn il-qċaċet tal-eċċitazzjoni u tal-emissjoni (Figura 2). Tipikament il-wavelength tal-emissjoni huwa itwal mill-wavelength tal-eċitazzjoni. Dan għaliex l-elettroni se jitilfu parti mill-enerġija tagħhom permezz tal-proċess ta 'rilassament wara li s-sustanza fluworexxenti tkun eċċitata u qabel ma rilaxx fotoni. Sustanzi fluworexxenti b'ċaqliq akbar ta' Stokes huma aktar faċli biex jiġu osservati taħt mikroskopju fluworexxenti.
mikroskopju fluworexxenti
Il-mikroskopju tal-fluworexxenza huwa mikroskopju ottiku li juża proprjetajiet tal-fluworexxenza għall-osservazzjoni u l-immaġini, u huwa użat ħafna f'diversi oqsma bħall-bijoloġija taċ-ċelluli, newrobijoloġija, botanika, mikrobijoloġija, patoloġija u ġenetika. L-immaġini ta 'fluworexxenza għandha l-vantaġġi ta' sensittività għolja u speċifiċità għolja, u hija adattata ħafna għall-osservazzjoni tad-distribuzzjoni ta 'proteini speċifiċi u organelli fit-tessuti u ċelloli, l-istudju ta' kolokalizazzjoni u interazzjoni, it-traċċar ta 'proċessi dinamiċi tal-ħajja bħal bidliet fil-konċentrazzjoni tal-joni , eċċ.
Il-biċċa l-kbira tal-molekuli fiċ-ċelloli ma jiffluworexxewx, u jekk trid tarahom, tittikkettjahom b'mod fluworexxenti. Hemm ħafna metodi ta 'tikkettjar fluworexxenti, bħal tikkettjar dirett (bħall-użu ta' DAPI biex tittikkettja d-DNA), jew immunostaining bl-użu tal-proprjetajiet li jorbtu l-antiġenu ta 'antikorpi, jew bl-użu ta' proteini fluworexxenti (bħal GFP, proteina fluworexxenti ħadra) biex tittikkettja proteini fil-mira , u rbit riversibbli. żebgħa sintetika (bħal Fura-2), eċċ.
Mikroskopju Fluworexxenti Invertit MF53-N
Fil-preżent, il-mikroskopju tal-fluworexxenza sar it-tagħmir standard tal-immaġini ta 'diversi laboratorji u pjattaformi tal-immaġini, u huwa helper tajjeb għall-esperimenti ta' kuljum tagħna. Mikroskopji fluworexxenti huma prinċipalment maqsuma fi tliet kategoriji: mikroskopji fluworexxenti wieqfa (adattati għat-taqsim), mikroskopji fluworexxenti invertiti (adattati għal ċelloli ħajjin, b'kont meħud tat-taqsim), stereoskopji fluworexxenti (adattati għal kampjuni akbar, bħal pjanti, zebrafish (adulti/embrijuni). ), medaka, organi tal-ġrieden/firien, eċċ.).
It-teknoloġija tal-immaġini tal-mikroskopija tal-fluworexxenza hija użata ħafna u rikka f'tipi, u teknoloġiji ġodda għadhom qed jitfaċċaw. Tista 'tagħżel it-teknoloġija biex tlesti r-riċerka tiegħek stess.
