Mikroskopija tal-Fluworexxenza Parametri Tekniċi Tekniki u Metodi tal-Mikroskopija tal-Fluworexxenza
Mikroskopju Fluworexxenti Parametri Tekniċi 1. Ocular b'angolu wiesa' 2. Lenti oġġettiva akromatika 3. Konvertitur tal-lenti oġġettiva b'erba' toqob 4. Apparat epifluworexxenti Blu (B) Sistema ta' eċċitazzjoni ħadra (G) 10Lampa tal-merkurju 0W 5. Mekkaniżmu ta 'aġġustament tal-fokus oħxon u fin koassjali: aġġustament Firxa tal-fokus: 15mm Valur tal-grilja tal-mikro-moviment: 0.002mm 6. Tabella mekkanika b'saff doppju Medda ta' moviment lonġitudinali: 70mm Firxa ta 'moviment laterali: 50mm
Parametri tekniċi tal-mikroskopju tal-fluworexxenza
1. Eyepiece b'angolu wiesa '
2. Lenti oġġettiva akromatika
3. Nosepiece b'erba 'fetħiet
4. Apparat epi-fluworexxenza blu (B) aħdar (G) sistema ta 'eċitazzjoni 100W fanal tal-merkurju
5. Mekkaniżmu ta 'aġġustament tal-fokus oħxon u fin koassjali: firxa ta' fokus 15mm valur tal-grilja tal-moviment fin 0.002mm
6. Bank tax-xogħol mekkaniku b'saff doppju
Firxa tal-moviment vertikali: 70 mm Firxa tal-moviment laterali: 50 mm
Ħiliet u Metodi tal-Mikroskopija tal-Fluworexxenza
(1) Slide tal-ħġieġ
Il-ħxuna tal-pjastra tal-ħġieġ għandha tkun bejn 0.8 u 1.2mm. Slide li hija ħoxna wisq se tassorbi aktar dawl minn naħa waħda, u min-naħa l-oħra, id-dawl ta 'eċitazzjoni ma jistax jiġi kkonċentrat fuq il-kampjun. Slajds għandhom ikunu lixxi, uniformi fil-ħxuna, u ħielsa minn awtofluworexxenza ovvja. Xi drabi jintużaw slides tal-ħġieġ tal-kwarz.
(2) Għatti tal-ħġieġ
Il-ħxuna tal-ħġieġa li tkopri hija ta 'madwar 0.17mm, lixxa. Sabiex tissaħħaħ id-dawl ta 'eċitazzjoni, jista' jintuża wkoll ħġieġ ta 'kopertura ta' interferenza, li huwa ħġieġ ta 'kopertura speċjali miksi b'diversi saffi ta' sustanzi (bħal fluworidu tal-manjeżju) li għandhom effetti ta 'interferenza differenti fuq dawl ta' wavelengths differenti, li jistgħu jagħmlu l- fluworexxenza tmur bla xkiel. Dawl eċċitanti jiġi mgħoddi u rifless, u dan id-dawl ta 'eċċitazzjoni rifless jeċita l-kampjun.
(3) Kampjun
Flieli tat-tessuti jew kampjuni oħra m'għandhomx ikunu ħoxnin wisq. Jekk ikun oħxon wisq, il-biċċa l-kbira tad-dawl ta 'eċitazzjoni se jiġi kkunsmat fil-parti t'isfel tal-kampjun, filwaqt li l-parti ta' fuq osservata direttament mil-lenti oġġettiva ma tkunx kompletament eċċitata. Barra minn hekk, il-koinċidenza taċ-ċelluli jew il-kopertura tal-impurità, jaffettwaw is-sentenza.
(4) Aġent tal-immuntar
Il-gliċerina tintuża komunement bħala aġent ta 'immuntar, li m'għandux ikollu awtofluworexxenza, bla kulur u trasparenti, u l-luminożità tal-fluworexxenza hija isbaħ f'pH 8.5-9.5, u mhuwiex faċli li fade malajr. Għalhekk, taħlita ugwali ta 'gliċerol u 0.5mol/l soluzzjoni buffer karbonat b'pH ta' 9.0 sa 9.5 tintuża komunement bħala aġent ta 'immuntar.
(5) mera taż-żejt
Ġeneralment, meta jiġu osservati kampjuni b'mikroskopji fluworexxenti ta 'kamp skur u lentijiet ta' immersjoni taż-żejt, għandu jintuża żejt ta 'immersjoni. L-aħjar huwa li tuża żejt speċjali ta 'immersjoni mhux fluworexxenti. Il-gliċerina ta 'hawn fuq tista' tintuża wkoll minflok, u l-paraffin likwida tista 'tintuża wkoll, iżda l-indiċi ta' rifrazzjoni huwa baxx, li għandu impatt żgħir fuq il-kwalità tal-immaġni. Influwenza.
Il-prinċipju u l-karatteristiċi strutturali tal-mikroskopju fluworexxenti
Il-mikroskopija tal-fluworexxenza tuża punt b'effiċjenza luminuża għolja biex temetti dawl ta 'ċertu wavelength (bħal dawl ultravjola 3650 pulzieri jew dawl blu vjola 4200 pulzieri) permezz tas-sistema tal-filtru bħala d-dawl ta' eċċitazzjoni biex teċita s-sustanzi fluworexxenti fil-kampjun biex jarmu fluworexxenza ta ' kuluri varji Wara dan, osserva permezz tal-ingrandiment tal-lenti oġġettiva u l-ocular. B'dan il-mod, taħt sfond ta 'kuntrast qawwi, anki jekk il-fluworexxenza hija dgħajfa ħafna, huwa faċli li tidentifika u għandha sensittività għolja. Jintuża prinċipalment għar-riċerka tal-istruttura u l-funzjoni taċ-ċelluli u l-kompożizzjoni kimika. L-istruttura bażika ta 'mikroskopju fluworexxenti hija magħmula minn mikroskopju ottiku ordinarju flimkien ma' xi aċċessorji (bħal sors ta 'dawl fluworexxenti, filtru ta' eċċitazzjoni, splitter tar-raġġ b'żewġ kuluri u filtru li jimblokka, eċċ.). Sors tad-dawl fluworexxenti—ġeneralment uża fanal tal-merkurju bi pressjoni ultra-għolja (50-200W), li jista’ jarmi dawl ta’ wavelengths varji, iżda kull sustanza fluworexxenti għandha wavelength ta’ eċċitazzjoni li tipproduċi l-aktar fluworexxenza qawwija, għalhekk filtru ta’ eċċitazzjoni (Ġeneralment, hemm filtri ta 'eċitazzjoni ultravjola, vjola, blu u aħdar), li jippermettu biss li dawl ta' eċċitazzjoni ta 'ċertu wavelength jgħaddi minn ġol-kampjun u irradja l-kampjun, filwaqt li jassorbu dawl ieħor. Wara li kull sustanza tiġi irradjata b'dawl ta 'eċitazzjoni, temetti fluworexxenza viżibbli b'wavelength itwal mill-wavelength tal-irradjazzjoni fi żmien qasir ħafna. Il-fluworexxenza hija speċifika u ġeneralment aktar dgħajfa mid-dawl ta 'eċitazzjoni. Sabiex tiġi osservata fluworexxenza speċifika, l-imblukkar (jew soppressjoni) għandu jiżdied wara l-lenti oġġettiva u jintuża flimkien magħha.
Id-differenza bejn mikroskopju fluworexxenti u mikroskopju ordinarju
1. Il-metodu ta 'illuminazzjoni huwa ġeneralment episkopiku, jiġifieri, is-sors tad-dawl huwa proġettat fuq il-kampjun permezz tal-lenti oġġettiva;
2. Is-sors tad-dawl huwa dawl ultravjola, il-wavelength huwa iqsar, u r-riżoluzzjoni hija ogħla minn dik ta 'mikroskopji ordinarji;
3. Hemm żewġ filtri speċjali, dak quddiem is-sors tad-dawl jintuża biex jiffiltra d-dawl viżibbli, u dak bejn l-ocular u l-lenti oġġettiva jintuża biex jiffiltra r-raġġi ultravjola biex jipproteġi l-għajn tal-bniedem.
Il-mikroskopju tal-fluworexxenza huwa wkoll tip ta 'mikroskopju ottiku, id-differenza ewlenija hija li l-wavelength ta' eċċitazzjoni tat-tnejn huwa differenti. Dan jiddetermina d-differenza bejn il-mikroskopju fluworexxenti u l-mikroskopju ottiku ordinarju f'termini ta 'struttura u użu.
Il-mikroskopija tal-fluworexxenza hija għodda essenzjali fiċ-ċitokimika immunofluworexxenti. Huwa magħmul minn komponenti ewlenin bħal sors tad-dawl, sistema tal-pjanċa tal-filtru u sistema ottika. Huwa li tuża ċertu wavelength ta 'dawl biex teċita l-kampjun biex temetti fluworexxenza, u tosserva l-immaġni tal-fluworexxenza tal-kampjun billi tamplifika l-lenti oġġettiva u s-sistema ta' l-għajnejn.
