Karatteristiċi u Applikazzjonijiet tal-Mikroskopija tal-Laser Confocal
Laser scanning confocal microscope (LSCM) huwa tip ta 'mikroskopju ddisinjat ibbażat fuq teknoloġija ta' fokus konjugat, jiġifieri, biex is-sors tad-dawl tal-lejżer, il-kampjun taħt test u d-ditekter kollha fil-pożizzjoni konjugata ta 'xulxin.
Fundamentali
F'mikroskopji ġenerali, il-pjan fokali tal-lenti oġġettiva jikkoinċidi mad-ditekter sabiex il-pjan tal-immaġini osservat ikun iżolat mill-pjan axjali li jmissu magħhom, filwaqt li f'mikroskopji konfokali, il-kampjun jiġi mdawwal bl-użu ta 'post tad-dawl limitat mid-diffrazzjoni, u fil- Dan l-effett ta 'iżolament jinkiseb bl-użu ta' pinhole fil-mogħdija tad-dawl tal-ġbir fil-punt fokali tal-konjugat tal-post biex tiffiltra d-dawl mitluf biex ittejjeb ir-riżoluzzjoni.
Karatteristiċi tal-Immaġini
Biss id-dawl rifless lura mis-saff tal-kampjun konjugat jista 'jgħaddi mit-toqba żgħira fil-mogħdija tad-dawl tal-ġbir, u r-riflessjonijiet tas-saff tal-kampjun irrilevanti li fadal huma mblukkati mit-toqba żgħira. Dan jista' jirriżulta f'żieda sinifikanti fir-riżoluzzjoni. Jintwera hawn taħt paragun ġenb ma 'ġenb ta' mikroskopija ta 'fluworexxenza multidimensjonali u mikroskopija konfokali tal-istess kampjun oħxon. Meta serje ta 'immaġini jittieħdu fi pjani fokali differenti, dak li komunement jissejjaħ "z-stack" jista' jiġi ġġenerat, u din l-immaġni turi kemm ir-riżoluzzjoni kif ukoll il-gwadann tal-kuntrast offruti mill-mikroskopija konfokali u l-kawżi sottostanti ta 'dawn il-qligħ. L-eżaminazzjoni tal-immaġni fil-quċċata tal-munzell bil-pjan tal-immaġini 'l fuq mit-tessut jiżvela ħafna dawl imxerred fl-immaġni fluworexxenti, filwaqt li l-immaġni konfokali tidher sewda. Dan it-tnaqqis fil-PSF fid-direzzjoni assjali huwa direttament responsabbli għad-differenza fir-riżoluzzjoni osservata fl-interface ottika fin-nofs tal-munzell z.
Karatteristika oħra tal-mikroskopija konfokali tal-iskannjar bil-lejżer hija li hija teknoloġija tal-immaġini tal-iskannjar. It-teknoloġija tradizzjonali tal-illuminazzjoni ta 'kamp wiesa' ddawwal il-kampjun kollu, sabiex l-immaġni tista 'tinqabad direttament mill-għajn jew ditekter, iżda LSCM juża raġġ jew Raġġi ffukati multipli jgħaddu mill-kampjun għall-iskannjar u l-immaġini, u l-immaġni li tirriżulta hija imsejħa sezzjoni ottika. Dan li ġej juri d-differenza bejn il-metodu tradizzjonali ta 'illuminazzjoni ta' kamp wiesa 'u l-metodu ta' illuminazzjoni konfokali tal-iskannjar bil-lejżer.
Għalhekk, metodu ta 'ħidma prattiku ta' mikroskopju konfokali modern jidher fil-figura hawn taħt. Id-dawl ta 'eċitazzjoni li joħroġ mill-lejżer jgħaddi minn mera dikrojka u jiskenja fid-direzzjonijiet x u y tal-kampjun permezz ta' par mirja li jivvibraw. L-eċitazzjoni (jew riflessjoni) tal-kampjun Id-dawl jidħol fid-ditekter PMT permezz tal-pinhole u jiġi rreġistrat, u l-immaġni tal-iskannjar irreġistrata tiġi rikostitwita mill-kompjuter biex tinkiseb l-immaġni tal-kampjun attwali.
