Differenzi u karatteristiċi bejn mikroskopju fluworexxenti u mikroskopju ottiku ordinarju
Il-mikroskopju tal-fluworexxenza huwa differenti mill-mikroskopju ottiku ordinarju. Ma josservax il-kampjun permezz tal-illuminazzjoni tas-sors tad-dawl ordinarju. Minflok, juża dawl ta 'ċertu wavelength (ġeneralment dawl ultravjola, dawl blu-vjola) biex teċita l-materjal fluworexxenti fil-kampjun taħt il-mikroskopju, u jġiegħlu jarmu fluworexxenza. Għalhekk, Is-sors tad-dawl ta 'mikroskopju fluworexxenti ma jservix bħala illuminazzjoni diretta, iżda bħala sors ta' enerġija li teċita l-materjal fluworexxenti intern tal-kampjun. Ir-raġuni għaliex nistgħu nosservaw il-kampjun mhix dovuta għall-illuminazzjoni tas-sors tad-dawl, iżda l-fenomenu fluworexxenti ikkawżat mill-materjal fluworexxenti fil-kampjun li jassorbi l-enerġija tad-dawl eċċitati. Wieħed jista 'jara li l-karatteristika ewlenija ta' mikroskopju fluworexxenti hija li s-sors tad-dawl tiegħu jista 'jipprovdi ammont kbir ta' dawl ta 'eċitazzjoni f'medda speċifika ta' wavelength, sabiex is-sustanzi fluworexxenti fil-kampjun taħt eżami jistgħu jiksbu l-intensità meħtieġa ta 'dawl ta' eċċitazzjoni. Fl-istess ħin, mikroskopji fluworexxenti għandu jkollhom sistemi ta 'filtri korrispondenti. Il-mikroskopija tal-fluworexxenza hija għodda essenzjali għall-istokimika tal-fluworexxenza avvanzata. Huwa magħmul minn sors ta 'dawl ta' pressjoni ultra-għolja, sistema ta 'filtru (inklużi pjanċi tal-filtri ta' eċċitazzjoni u soppressjoni), sistema ottika u sistema ta 'fotografija. Juża dawl ta 'ċertu wavelength biex teċita l-kampjun biex jarmu fluworexxenza.
1. Modi kif teċita l-fluworexxenza: Skont il-firxa tal-wavelength tad-dawl, hija maqsuma f'żewġ tipi: metodu ta 'eċitazzjoni UV (bl-użu ta' metodu ta 'illuminazzjoni ultravjola) u metodu ta' eċċitazzjoni BV (bl-użu ta 'dawl blu-vjola). Il-metodu ta 'eċitazzjoni UV juża dawl qrib ultravjola iqsar minn 400nm għall-eċitazzjoni. M'hemm l-ebda dawl ta 'eċitazzjoni viżibbli f'dan il-metodu, għalhekk il-fluworexxenza osservata turi l-fluworexxenza inerenti taż-żebgħa, li tagħmilha faċli li tiddistingwi l-fluworexxenza speċifika fuq il-kampjun mill-awtofluworexxenza tat-tessut tal-isfond.
2. Metodu ta 'eċitazzjoni BV: eċċitazzjoni minn dawl ultravjola għal dawl blu ċċentrata f'404nm u 434nm. Dan il-metodu juża dawl blu biex idawwal il-kampjun, għalhekk il-filtru tal-qtugħ tas-sistema ta 'osservazzjoni tal-fluworexxenza għandu juża filtru li jista' jimblokka kompletament id-dawl blu u jgħaddi bis-sħiħ il-fluworexxenza aħdar u isfar meħtieġa. Żebgħat fluworexxenti użati f'metodi ta 'antikorpi fluworexxenti. Il-wavelength ta 'assorbiment massimu ta' dawl ta 'eċitazzjoni u l-wavelength ta' emissjoni massima ta 'fluworexxenza huma relattivament qrib, għalhekk il-filtru użat fil-metodu ta' eċċitazzjoni BV għandu juża filtru ta 'qtugħ qawwi. Dan il-metodu jista 'juża dawl blu bħala dawl ta' eċċitazzjoni, għalhekk l-effiċjenza ta 'assorbiment ta' pigmenti fluworexxenti hija ogħla u jistgħu jinkisbu stampi isbaħ. L-iżvantaġġ huwa li l-fluworexxenza taħt il-500nm ma tistax tidher, filwaqt li l-fluworexxenza 'l fuq minn 500nm tagħmel l-immaġni kollha tidher isfar. Fil-metodu tal-antikorpi fluworexxenti, l-ispeċifiċità taż-żebgħa fluworexxenti hija ġġudikata l-aktar mill-kulur uniku tagħha. Għalhekk, meta tiddiskuti l-ispeċifiċità sottili, in-nuqqasijiet imsemmija hawn fuq tal-metodu ta 'eċitazzjoni BV ħafna drabi jkollhom impatt kbir.
