Differenza bejn mikroskopju fluworexxenti u mikroskopju ottiku ordinarju
Mikroskopju fluworexxenti u mikroskopju ottiku ordinarju differenza, mikroskopju fluworexxenti u mikroskopju ottiku ordinarju huwa differenti, mhuwiex permezz tal-illuminazzjoni tas-sors tad-dawl ordinarju biex josserva l-kampjun, iżda l-użu ta 'ċertu wavelength ta' dawl (ġeneralment ultravjola, blu-vjola) eċċitazzjoni tal-kampjun taħt il-mikroskopju fi ħdan il-materjal fluworexxenti, sabiex temetti dawl fluworexxenti, għalhekk ir-rwol tal-mikroskopju fluworexxenti fis-sors tad-dawl mhuwiex dawl dirett, iżda bħala tip ta 'stimulazzjoni ta' kampjuni tal-fluworexxenza ta 'ġewwa Id-dawl sors tal-mikroskopju fluworexxenti mhuwiex illuminazzjoni diretta, iżda bħala sors ta 'enerġija biex tistimula s-sustanza fluworexxenti ġewwa l-kampjun. Ir-raġuni għaliex nistgħu nosservaw il-kampjun mhix dovuta għall-illuminazzjoni tas-sors tad-dawl, iżda l-fenomenu fluworexxenti ppreżentat mis-sustanza fluworexxenti fil-kampjun wara li jassorbi l-enerġija tad-dawl eċċitati. Jista 'jidher li l-karatteristiċi tal-mikroskopju fluworexxenti huma prinċipalment li s-sors tad-dawl tiegħu jista' jforni numru kbir ta 'firxa ta' wavelength speċifika ta 'dawl ta' eċċitazzjoni, sabiex is-sustanzi fluworexxenti fi ħdan il-kampjun eżaminat jistgħu jiksbu l-intensità meħtieġa ta 'dawl ta' eċċitazzjoni. Fl-istess ħin, il-mikroskopju fluworexxenti għandu jkollu sistema ta 'filtru korrispondenti. Il-mikroskopju tal-fluworexxenza huwa l-għodda bażika għall-**istokimika tal-fluworexxenza. Huwa magħmul minn sors ta 'dawl ta' pressjoni ultra-għolja, sistema ta 'filtru (inkluża pjanċa tal-filtru ta' eċċitazzjoni u soppressjoni), sistema ottika u sistema fotografika u komponenti ewlenin oħra, huwa l-użu ta 'ċertu wavelength ta' dawl biex jistimula l-kampjun biex jarmu fluworexxenza.
1. il-mod ta 'eċitazzjoni tal-fluworexxenza: skond il-medda ta' wavelength tad-dawl hija maqsuma f'metodu ta 'eċitazzjoni UV (bl-użu ta' illuminazzjoni ultravjola) u metodu ta 'eċitazzjoni BV (bl-użu ta' dawl vjola blu) żewġ tipi ta 'metodu ta' eċċitazzjoni UV huwa iqsar minn 400nm ħdejn dawl ultravjola għal eċċitazzjoni. M'hemm l-ebda dawl ta 'eċċitazzjoni viżibbli f'dan il-metodu, għalhekk il-fluworexxenza osservata turi l-fluworexxenza inerenti taż-żebgħa, u huwa faċli li tiddistingwi l-fluworexxenza speċifika fuq il-kampjun mill-awtofluworexxenza tat-tessut tal-isfond.
2. Metodu ta 'eċitazzjoni BV: Il-metodu huwa ċċentrat fuq 404nm, 434nm minn dawl ultravjola għal dawl blu għall-eċitazzjoni. Dan il-metodu juża dawl blu biex irradja l-kampjun, għalhekk il-filtru cut-off tas-sistema ta 'osservazzjoni tal-fluworexxenza għandu juża filtru li jista' jimblokka kompletament id-dawl blu u jgħaddi bis-sħiħ il-fluworexxenza ħadra u isfar mixtieqa. Pigmenti fluworexxenti għall-metodu ta 'antikorpi fluworexxenti. Peress li l-wavelength ta 'l-assorbiment massimu tad-dawl ta' eċċitazzjoni u l-wavelength ta 'l-emissjoni massima tal-fluworexxenza huma qrib xulxin, il-filtri użati fil-metodu ta' eċċitazzjoni BV għandhom ikunu filtri ta 'qtugħ qawwi. Dan il-metodu juża dawl blu bħala d-dawl ta 'eċitazzjoni, għalhekk l-effiċjenza ta' assorbiment tal-fluorokrom hija ogħla u tista 'tinkiseb immaġni isbaħ. L-iżvantaġġ huwa li l-fluworexxenza taħt il-500 nm ma tistax tidher, u 'l fuq minn 500 nm l-immaġni kollha tidher isfar. Fil-metodu tal-antikorpi fluworexxenti, ħafna mill-ispeċifiċità hija ġġudikata mill-kulur uniku għall-fluworochrome, għalhekk l-iżvantaġġi tal-metodu ta 'eċitazzjoni BV deskritt hawn fuq għandhom tendenza li jkunu estremament influwenti meta tiddiskuti l-ispeċifiċità sottili.
