Klassifikazzjoni u ħidma ta' mikroskopji għar-riċerka taċ-ċelluli
Il-mikroskopju huwa l-għodda primarja għall-osservazzjoni taċ-ċelloli. Skont sorsi tad-dawl differenti, jista 'jinqasam f'żewġ kategoriji: mikroskopji ottiċi u mikroskopji elettroniċi. Ta 'l-ewwel juża dawl viżibbli (mikroskopji UV jużaw dawl ultravjola) bħala s-sors tad-dawl, filwaqt li l-aħħar juża raġġi ta' elettroni bħala s-sors tad-dawl.
-,Mikroskopju ottiku
(1) Mikroskopju ottiku ordinarju
Mikroskopji bijoloġiċi ordinarji huma komposti minn tliet partijiet, jiġifieri: ① sistema ta 'illuminazzjoni, inkluż sors tad-dawl u kondensatur; ② sistema ta 'ingrandiment ottiku, komposta minn lenti oġġettiva u eyepiece, li hija l-korp ewlieni tal-mikroskopju. Sabiex tiġi eliminata l-aberrazzjoni sferika u l-aberrazzjoni kromatika, kemm l-ocular kif ukoll l-objettiv ③Apparat mekkaniku, użat biex jiffissa l-materjal u jiffaċilita l-osservazzjoni (Figura 2-1).
Jekk l-immaġni tal-mikroskopju hijiex ċara mhux biss iddeterminat mill-ingrandiment, iżda wkoll relatat mar-riżoluzzjoni tal-mikroskopju. Ir-riżoluzzjoni tirreferi għall-kapaċità tal-mikroskopju (jew l-għajn tal-bniedem li tkun 25cm 'il bogħod mill-mira) biex tiddistingwi l-iżgħar distanza bejn l-oġġetti. Id-daqs tar-riżoluzzjoni huwa ddeterminat minn Il-wavelength u l-proporzjon tal-apertura tad-dawl u l-indiċi refrattiv tal-medju huma espressi bil-formula:
Fil-formula: n=indiċi refrattiv tal-medju;=angolu tal-apertura (l-angolu tal-ftuħ tal-kampjun mal-apertura tal-lenti oġġettiva), NA=apertura tal-lenti (apertura numerika). L-angolu tal-lenti huwa dejjem inqas minn 180 grad, għalhekk il-valur massimu ta 'sina/2 għandu jkun inqas minn 1.
L-indiċi refrattiv tal-ħġieġ użat biex jagħmel il-lenti ottika huwa 1.65 sa 1.78, u l-indiċi refrattiv tal-mezz użat huwa eqreb tal-ħġieġ, l-aħjar. Għal lentijiet oġġettivi niexfa, il-medju huwa l-arja, u l-proporzjon tal-apertura tal-lenti huwa ġeneralment 0.05 sa 0.95; għal lentijiet taż-żejt, iż-żejt taċ-ċedru jintuża bħala l-mezz, u l-proporzjon tal-apertura tal-lenti jista 'jkun qrib 1.5.
Il-wavelength tad-dawl ordinarju huwa {{0}} nm, għalhekk il-valur tar-riżoluzzjoni tal-mikroskopju mhux se jkun inqas minn 0.2μm, u r-riżoluzzjoni tal-għajn tal-bniedem hija 0.2mm, għalhekk il- ingrandiment massimu tad-disinn tal-mikroskopju ġenerali huwa ġeneralment 1000X.
(2) Mikroskopija tal-fluworexxenza
Xi sustanzi fiċ-ċelloli, bħall-klorofilla, jistgħu jiffluworexxew wara li jiġu irradjati minn raġġi ultravjola; xi sustanzi nfushom ma jistgħux jiffluworexxew, iżda jekk huma mtebbgħin b'żebgħat fluworexxenti jew antikorpi fluworexxenti, jistgħu wkoll jiffluworexxew meta jiġu irradjati minn raġġi ultravjola, u l-mikroskopju fluworexxenti (Fig. 2-2, 3, 4) huwa wieħed mill-għodod għal riċerka kwalitattiva u kwantitattiva dwar sustanzi bħal dawn.
Mikroskopji fluworexxenti u mikroskopji ordinarji għandhom id-differenzi li ġejjin:
1. Il-metodu ta 'illuminazzjoni huwa ġeneralment epi-illuminazzjoni, jiġifieri, is-sors tad-dawl huwa proġettat fuq il-kampjun permezz tal-lenti oġġettiva (Figura 2-3);
2. Is-sors tad-dawl huwa dawl ultravjola, il-wavelength huwa iqsar, u r-riżoluzzjoni hija ogħla minn dik ta 'mikroskopji ordinarji;
3. Hemm żewġ filtri speċjali, dak quddiem is-sors tad-dawl jintuża biex jiffiltra d-dawl viżibbli, u dak bejn l-ocular u l-lenti oġġettiva jintuża biex jiffiltra d-dawl ultravjola biex jipproteġi l-għajnejn.
(3) Mikroskopju konfokali tal-iskannjar bil-lejżer
Mikroskopju tal-iskannjar konfokali tal-lejżer (mikroskopju tal-iskannjar konfokali tal-laser, Figura 2-5, 6) juża l-lejżer bħala sors tad-dawl tal-iskannjar, u jiskenja l-immaġini punt b'punt, linja b'linja, wiċċ b'wiċċ, u l-ġbir tal-lejżer tal-iskannjar u tal-fluworexxenza jaqsmu lenti oġġettiva, u l-fokus tal-lenti oġġettiva hija Il-punt fokali tal-laser tal-iskannjar huwa wkoll il-punt tal-oġġett tal-immaġni istantanja. Minħabba li l-wavelength tar-raġġ tal-lejżer huwa qasir u r-raġġ huwa rqiq ħafna, il-mikroskopju tal-iskannjar tal-lejżer konfokali għandu riżoluzzjoni ogħla, li hija madwar 3 darbiet dik ta 'mikroskopju ottiku ordinarju. Is-sistema hija ffukata darba u l-iskan huwa limitat għal pjan wieħed tal-kampjun. Meta l-fond li jiffoka huwa differenti, jistgħu jinkisbu stampi ta 'livelli ta' fond differenti tal-kampjun. Din l-informazzjoni dwar l-immaġni huma maħżuna fil-kompjuter. Permezz ta 'analiżi u simulazzjoni tal-kompjuter, tista' tintwera l-istruttura tridimensjonali tal-kampjun taċ-ċellula.
Il-mikroskopija tal-iskannjar tal-laser konfokali tista 'tintuża mhux biss biex tosserva l-morfoloġija taċ-ċelluli, iżda wkoll għal analiżi kwantitattiva ta' komponenti bijokimiċi intraċellulari, statistika ta 'densità ottika u kejl tal-morfoloġija taċ-ċelluli.
(4) Mikroskopju tal-kamp skur
Il-mikroskopju tal-kamp skur (mikroskopju tal-kamp skur, Figura 2-7) għandu folja ħafifa fiċ-ċentru tal-kondensatur, sabiex id-dawl tal-illuminazzjoni ma jidħolx direttament fil-lenti tal-bniedem, u d-dawl biss rifless u diffratt mill-kampjun jitħalla jidħol fil-lenti oġġettiva, għalhekk l-isfond tal-kamp viżiv huwa iswed, It-truf tal-oġġetti huma jleqqu. Bl-użu ta 'dan il-mikroskopju, jistgħu jidhru partiċelli żgħar daqs 4-200nm, u r-riżoluzzjoni tista' tkun 50 darba ogħla minn dik ta 'mikroskopji ordinarji.
(5) Mikroskopju tal-kuntrast tal-fażi
Mikroskopju tal-kuntrast tal-fażi (mikroskopju tal-kuntrast tal-fażi, Figura 2-8, 9) minn P. Zernike ġie ivvintat fl-1932 u rebaħ il-Premju Nobel fil-Fiżika fl-1953 għalih. L-akbar karatteristika ta 'dan il-mikroskopju hija li jista' josserva kampjuni mhux imtebba u ċelloli ħajjin.
Il-prinċipju bażiku tal-mikroskopija tal-kuntrast tal-fażi huwa li tbiddel id-differenza tal-passaġġ ottiku tad-dawl viżibbli li jgħaddi mill-kampjun f'differenza ta 'amplitudni, u b'hekk itejjeb il-kuntrast bejn diversi strutturi u jagħmel diversi strutturi viżibbli b'mod ċar. Wara li jgħaddi mill-kampjun, id-dawl jiġi rifratt, iddevjat mill-mogħdija ottika oriġinali, u mdewwem b'1/4λ (tul ta 'mewġ). Issaħħaħ, iżżid jew tnaqqas l-amplitudni, żid il-kuntrast. F'termini ta 'struttura, mikroskopji tal-kuntrast tal-fażi għandhom żewġ karatteristiċi speċjali li huma differenti minn mikroskopji ottiċi ordinarji:
1. Id-dijaframma annulari tinsab bejn is-sors tad-dawl u l-kondensatur, u l-funzjoni tagħha hija li d-dawl li jgħaddi mill-kondensatur jifforma kon tad-dawl vojt u jiffoka fuq il-kampjun.
2. Il-pjanċa tal-fażi (plate tal-fażi annulari) żżid pjanċa tal-fażi miksija bil-fluworidu tal-manjeżju fil-lenti oġġettiva, li tista 'titdewwem il-fażi ta' dawl dirett jew dawl diffrattat b'1/4λ. Hemm żewġ tipi:
①A plus plate phase: Id-dawl dirett jittardja b'1/4λ. Wara li ż-żewġ gruppi ta 'mewġ tad-dawl huma kkombinati, il-mewġ tad-dawl huma miżjuda flimkien, u l-amplitudni tiżdied. L-istruttura tal-kampjun hija isbaħ mill-mezz tal-madwar, u tifforma kuntrast qawwi (jew kuntrast negattiv).
② B flimkien mal-pjanċa tal-fażi: Id-dawl diffrattat jittardja b'1/4λ. Wara li ż-żewġ settijiet ta 'raġġi jiġu kkombinati, il-mewġ tad-dawl jitnaqqsu, u l-amplitudni ssir iżgħar, u tifforma kuntrast skur (jew kuntrast pożittiv), u l-istruttura hija aktar skura mill-medju tal-madwar.
