Mikroskopija bijoloġika fuq il-volum ta 'blokki tat-tessut
Bijomikroskopija Sal-lum, fissazzjoni kiesħa bis-silġ, sezzjonijiet ultra-rqaq iffriżati u manipulazzjoni niexfa ffriżata huma metodi ta 'rutina għal mikrokampijiet tar-raġġi-x ta' tessuti u ċelloli. Id-dettalji tal-metodu huma spjegati fil-punti li ġejjin:
Mikroskopji bijoloġiċi Mikroskopji b'lenti ta 'kondensatur jistgħu jitmexxew 'il fuq u 'l isfel biex tinkiseb luminożità moderata, jew l-apertura tal-espansjoni tad-dawl varjabbli tista' tinbidel biex tinkiseb luminożità moderata 9b. Jekk id-dawl ikun xemxi, l-iskop ta ' l-ispotting jista ' jittella' kif xieraq, u l-apertura tad-dawl varjabbli jistgħu jitkabbru kif xieraq. Jekk id-dawl huwa qawwi wisq, allura l-mera spotlight tista 'tkun xierqa isfel, l-apertura tal-qabża tad-dawl varjabbli għal tnaqqis xieraq. Jekk f'dan il-każ xorta tħossok blinding, allura inti tista 'tagħżel il-filtru xieraq imqiegħed fil-parentesi taħt l-attenzjoni. Dan jista 'jinkiseb biex tagħmel inti sodisfatt bil-luminożità. Naturalment, fl-aġġustament tal-pożizzjonijiet ta 'fuq u t'isfel tal-lenti tal-kondensatur jista' jvarja d-daqs tal-apertura tal-qari tad-dawl u l-għażla ta 'filtri xierqa, jiġifieri wara ċertu perjodu ta' prattika u esperjenza.
Mikroskopju bijoloġiku Kwistjoni importanti ħafna hija fil-proċess tat-teħid tal-kampjuni u s-separazzjoni taċ-ċelloli, it-tnixxif bil-friża u l-inkorporazzjoni tar-reżina (FD) wara l-iffriżar ta 'fuljetti ultra, it-tnixxif bil-friża wara l-ġirja fina ta' kull parti tal-kontenut tal-kompożizzjoni elementali 65 għandu jkun mmaniġġjati b'attenzjoni kbira, u m'għandhomx jagħmlu ħsara liċ-ċelloli li għandhom jiġu osservati u analizzati. Minħabba li l-analiżi tal-mikro-żona tar-raġġi-x mhix biss ħafna passi, u l-ispiża hija għolja ħafna, jekk wara żmien twil u passi multipli ta 'proċessar, iċ-ċelluli analizzati huma ċelluli bil-ħsara jew ċelluli mejta, biex tiġbed konklużjonijiet żbaljati huwa ta' dispjaċir ħafna. Pereżempju, il-kardjomijoċiti iżolati mit-trattament tal-collagenase għandhom żewġ morfoloġiji, waħda hija forma ta 'virga twila u l-oħra hija tonda. Dawn tal-aħħar huma ċelluli li qed imutu li ġew imħassra waqt l-iżolament taċ-ċelluli.
Bijomikroskopija Il-kontenut u d-distribuzzjoni ta 'elettroliti f'dawn iż-żewġ tipi ta' ċelloli huma differenti ħafna. Na kien għoli ħafna u K baxx ħafna fil-kardjomijoċiti tondi, u l-konċentrazzjoni ta 'ca kienet għolja ħafna fil-mitokondrija. Wara li ċċekkja b'metodi analitiċi oħra, intwera li n-Na għolja u K baxx fiċ-ċelloli tondi u l-ca għoli fil-mitokondrija kienu r-riżultat ta 'ħsara lill-membrana taċ-ċellula waqt is-separazzjoni taċ-ċelluli. L-iffissar kiesaħ taċ-ċelloli u t-tessuti ħafna drabi jsir permezz ta 'fissazzjoni ta' quench segwita minn preservazzjoni fin-nitroġenu likwidu. L-iffissar tat-tifi huwa importanti għall-effettività tal-preservazzjoni. Ċelloli ħajjin jew tessuti friski huma sinjuri fl-ilma, meta t-tifi huwa spiss iċ-ċelloli jew tessuti u l-aġent kiesaħ (speċjalment ma 'nitroġenu likwidu kiesaħ pur) kuntatt dirett mal-partijiet ta' l-ewwel iffriżar-fissazzjoni, u b'hekk jiffurmaw "qoxra", li jipprevjeni ċ-ċentru tal-fissazzjoni tal-kesħa taċ-ċellula. Bħala riżultat, il-kristalli tas-silġ spiss jinstabu fiċ-ċentru ta 'ċelloli akbar waqt l-analiżi mikroċellulari tar-raġġi-x. Sabiex dan ma jseħħx, sustanzi b'punt ta 'tidwib ogħla min-nitroġenu likwidu iżda inqas minn 806c niexef jintużaw bħala aġenti li jkessħu. Hemm ħafna sustanzi bħal dawn, iżda * faċli biex tinkiseb, irħas huwa propan ikkonċentrat (punt tat-togħlija ta '42.120c, punt ta' tidwib ta '187.10c, piż molekulari ta' 44.1), ir-rata ta 'tkessiħ * veloċi. Madankollu, għandu l-iżvantaġġ li jaqbad.
Mikroskopju bijoloġiku jista 'jitqiegħed fuq fibra tal-muskoli ta' l-ixkaffa speċjali, sabiex il-kontrazzjoni tal-fibra tal-muskoli biex tilħaq ċertu fażi ta 'żmien jeħtieġ li tiġi ffissata, ibda immedjatament iż-żennuna, sabiex il-propan likwidu għall-ġett tal-fibra tal-muskoli, sabiex it-tifi tal- il-kesħa fiss. Imbagħad il-fibra tal-muskoli tinħareġ flimkien mar-rack u titqiegħed f'nitroġenu likwidu. Jekk iffissar ċelluli tad-demm jew ċelluli iżolati, l-ewwel ċentrifugazzjoni b'veloċità baxxa biex jagħmlu ċ-ċelloli kkonċentrati, iċ-ċelloli se jiġu trasferiti għal konduttività termali tajba tat-tubu tal-fidda, it-tubu fil-karkassa tal-propan likwidu ffissat kiesaħ. Laboratorju tas-sala frixa tal-firien fiss, l-ewwel żewġ biċċiet ta 'l-azzar b'elju likwidu (jew nitroġenu likwidu) tkessiħ minn qabel, b'morsa kklampjata ż-żewġ biċċiet tar-ram se jitqiegħdu quddiem u wara l-frixa, sabiex iż-zija tal- iffissar kiesaħ tat-tifi tal-glandola. It-tessuti jew iċ-ċelloli jistgħu jinħażnu fin-nitroġenu likwidu għal żmien twil wara t-tifi u l-iffissar.
