Mikroskopju bijoloġiku rigward il-volum ta 'blokki tat-tessut
Mikroskopija bijoloġika S'issa, l-iffissar kiesaħ, it-taqsim ultrathin iffriżat u t-tnixxif bil-friża huma metodi ta 'rutina għall-mikro-sezzjoni tar-raġġi-x ta' tessuti u ċelloli. Dawn li ġejjin huma d-dettalji ta 'dan il-metodu:
Mikroskopji bijoloġiċi. Għal mikroskopji b'kondensatur, il-kondensatur jista 'jiġi mċaqlaq 'il fuq u' l isfel biex tinkiseb luminożità moderata. Barra minn hekk, l-apertura tad-dijodi li jarmu d-dawl varjabbli tista 'tinbidel biex tinkiseb luminożità moderata 9b. Jekk id-dawl ikun qawwi, il-kondensatur jista 'jitla' kif xieraq u l-apertura tad-dawl varjabbli tista 'tiġi mkabbra b'mod xieraq. Jekk id-dawl ikun qawwi wisq, il-kondensatur jista 'jitbaxxa b'mod xieraq u l-apertura tar-raġġ tad-dawl inkroċjat tista' titnaqqas b'mod xieraq. Jekk xorta tħossok tgħammix taħt din is-sitwazzjoni, tista 'tagħżel filtru xieraq u poġġih fuq il-parentesi taħt il-kondensatur. Dan il-mod tista 'tikseb il-luminożità li tissodisfak. Naturalment, jeħtieġ ċertu perjodu ta 'prattika biex tikseb esperjenza fl-aġġustament tal-pożizzjoni 'l fuq u' l isfel tal-kondensatur biex jinkiseb daqs ta 'apertura varjabbli u tagħżel filtri xierqa.
Kwistjoni importanti ħafna fil-mikroskopija bijoloġika hija li matul il-proċess tal-ġbir u s-separazzjoni taċ-ċelloli, wara t-tnixxif bil-friża u l-inkorporazzjoni tar-reżina (FD), wara l-iffriżar ta 'gerbub ultra-rqaq, u wara t-tnixxif bil-friża, il-kontenut ta' 65 element ta 'kull parti għandu jiġu analizzati b'attenzjoni kbira, u assolutament M'għandekx ħsara liċ-ċelloli li għandhom jiġu analizzati. Minħabba li l-analiżi tal-mikro-żona tar-raġġi X mhux biss tinvolvi ħafna passi, iżda wkoll tiswa ħafna. Jekk wara żmien twil u passi multipli, iċ-ċelluli analizzati huma ċelluli bil-ħsara jew ċelluli mejta, tkun ħasra li tiġbed konklużjonijiet żbaljati. Pereżempju, kardjomijoċiti iżolati wara t-trattament tal-collagenase għandhom żewġ forom, waħda hija forma ta 'virga twila u l-oħra hija tonda. Dawn tal-aħħar huma ċelluli li jmutu li huma mħassra waqt l-iżolament taċ-ċelluli.
Mikroskopija Bijoloġika Il-kontenut u d-distribuzzjoni ta 'elettroliti f'dawn iż-żewġ tipi ta' ċelloli huma differenti ħafna. Na huwa għoli ħafna u K huwa baxx ħafna f'kardjomijoċiti tondi, u l-konċentrazzjoni ta 'Ca f'fergħat lineari hija għolja ħafna. Wara li ċċekkja b'metodi oħra ta 'analiżi, ġie ppruvat li n-Na għoli u K baxx fiċ-ċelloli tondi u l-ca għoli fil-mitokondrija kienu dovuti għall-ħsara lill-membrana taċ-ċellula matul il-proċess ta' separazzjoni taċ-ċelluli. Il-metodu ta 'fissazzjoni tal-kesħa taċ-ċelloli u t-tessuti ħafna drabi huwa li l-ewwel jitkeffhom u jiffissawhom, u mbagħad aħżenhom fin-nitroġenu likwidu. It-tifi u l-iffissar huma importanti ħafna għall-effett tal-preservazzjoni. Iċ-ċelloli ħajjin jew it-tessuti friski huma sinjuri fl-ilma. Waqt it-tifi, il-partijiet taċ-ċelloli jew tat-tessuti li huma f'kuntatt dirett mal-krijoġenu (speċjalment meta jitkessħu bin-nitroġenu likwidu) l-ewwel jiġu ffriżati u ffissati, u b'hekk jiffurmaw "qoxra", li tfixkel il- Il-parti ċentrali taċ-ċelloli kienet imfarrak u ffissat bil-kesħa. Għalhekk, meta tagħmel analiżi tal-mikro-erja tal-linja X, ħafna drabi jinstab li hemm kristalli tas-silġ fiċ-ċentru ta 'ċelloli akbar. Sabiex dan ma jseħħx, sustanza b'punt ta' tidwib ogħla min-nitroġenu likwidu iżda b'nixfa aktar baxxa ta' -806ċ tintuża bħala r-refriġerant imfarrak. Hemm ħafna sustanzi bħal dawn, iżda l-aktar wieħed faċli u irħas huwa propan ikkonċentrat (punt tat-togħlija - 42.120c, punt tat-tidwib - 187.10c, piż molekulari 44.1), u r-rata tat-tkessiħ hija wkoll l-aktar mgħaġġla. Iżda l-iżvantaġġ tiegħu huwa li jaqbad.
Mikroskopju bijoloġiku jista 'jpoġġi l-fibra tal-muskoli fuq qafas speċjali. Meta l-kontrazzjoni tal-fibra tal-muskoli tilħaq ċerta fażi u teħtieġ li tiġi ffissata, iż-żennuna tinbeda immedjatament biex tisprejja propan likwidu lill-fibra tal-muskoli biex titfiha u tiffissa. Imbagħad il-fibri tal-muskoli flimkien mal-qafas inħarġu u tpoġġew f'nitroġenu likwidu. Jekk ċelluli tad-demm jew ċelluli separati huma ffissati, l-ewwel ċentrifuga b'veloċità baxxa biex tikkonċentra ċ-ċelloli, ittrasferixxi ċ-ċelloli għal tubu żgħir tal-fidda b'konduttività termali tajba, poġġi t-tubu fi propan likwidu u ffriżah biex tiffissah. Meta tiffissa l-frixa tal-firien fil-laboratorju Hall, l-ewwel kessaħ minn qabel iż-żewġ blokki ta 'l-azzar b'elju likwidu (jew nitroġenu likwidu), ikklampja ż-żewġ blokki tar-ram bil-forceps, u poġġihom qabel u wara l-frixa biex itaffi u tiffissa l-glandola ta' l-utru . It-tessuti jew iċ-ċelloli jistgħu jiġu mitfija u ffissati u mbagħad trasferiti għal nitroġenu likwidu għal ħażna fit-tul.
