Applikazzjoni tal-Mikroskopija tal-Fworexxenza ta' Riflessjoni Interna Totali tal-Fluworexxenza
TIRFM (Total Internal Reflection Fluorescence Microscope), mikroskopju ta 'fluworexxenza ta' riflessjoni interna totali, meta d-dawl jidħol f'medju b'indiċi ta 'rifrazzjoni aktar baxx minn medju b'indiċi ta' rifrazzjoni għoli, jekk l-angolu inċidentali huwa kbir biżżejjed, id-dawl kollu jiġi rifless mingħajr rifrazzjoni, iżda f'L-interface taż-żewġ midja tipproduċi mewġ evanexxenti li jista 'jiġri l-fluworexxenza fi ħdan 100nm ħdejn l-interface biex tirrealizza l-osservazzjoni tal-wiċċ tal-oġġett. Id-dawl ta 'eċitazzjoni jista' jintbagħat permezz tal-illuminatur ta 'mikroskopju fluworexxenti konvenzjonali jew illuminatur speċjali, u l-angolu inċidentali tal-lejżer jista' jiġi kkontrollat. Il-metodu ta 'eċitazzjoni tal-kamp istantanju jintuża biex jipprevjeni li d-dawl ta' eċċitazzjoni jidħol fid-ditekter. Id-dawl ta 'eċitazzjoni fl-interface bejn il-ħġieġ u l-ilma jipproduċi intern sħiħ implimentat permezz ta' riflessjoni. Minħabba l-attenwazzjoni esponenzjali tad-dawl ta 'eċitazzjoni, iż-żona tal-kampjun biss qrib ħafna tal-wiċċ ta' riflessjoni totali se tipproduċi riflessjoni tal-fluworexxenza, li tnaqqas ħafna l-interferenza tal-ħoss tad-dawl fl-isfond għall-mira tal-osservazzjoni, għalhekk din it-teknoloġija tintuża ħafna fl-osservazzjoni dinamika tas-sustanzi tal-wiċċ taċ-ċelluli.
Dijagramma skematika tal-mikroskopija fluworexxenti ta' riflessjoni interna totali (TIRFM)
①Kampjun ②Medda ta' mewġ evanexxenti ③Ħġieġ tal-għatu ④Immersjoni taż-żejt ⑤Target ⑥Raġġ ta' emissjoni (sinjal) ⑦Raġġ ta' eċċitazzjoni
Sabiex tinkiseb riflessjoni interna totali, huwa meħtieġ angolu inċidentali kbir, pereżempju, l-angolu inċidentali fl-interface tal-ħġieġ-ilma huwa akbar minn 61 grad. Dan jista 'jinkiseb permezz ta' priżma, imsejħa TIRFM ibbażata fuq priżma, jew minn lenti oġġettiva b'apertura numerika għolja, li tissejjaħ TIRFM tat-tip oġġettiv. Il-mikroskopji fluworexxenti ta 'riflessjoni interna totali kummerċjalizzati kurrenti huma ġeneralment tat-tip ta' lenti oġġettiva, b'veloċità għolja u preċiżjoni għolja.
Il-mikroskopija tal-fluworexxenza ta 'riflessjoni interna totali tintuża ħafna f'xi oqsma bijoloġiċi minħabba li tista' tirrealizza l-osservazzjoni tal-fluworexxenza f'medda rqiqa ħafna (inqas minn 100nm) fuq il-wiċċ tal-oġġetti. Bħall-applikazzjonijiet li ġejjin:
Osservazzjoni ta 'immaġini tal-wiċċ taċ-ċelluli: struttura tal-wiċċ tal-membrana taċ-ċelluli, kuntatt mal-wiċċ taċ-ċelluli, dinamika tal-wiċċ tal-membrana/lokalizzazzjoni tal-proteini.
Osservazzjoni u manipulazzjoni ta' molekula waħda: ATP ittikkettat myosin, actin, u Cy3-.
Moviment tal-wiċċ tal-membrana taċ-ċelluli: bħall-ingaġġ tal-vesiku, l-exhalation tal-vesikula, u l-exocrine tal-vesikula. il
Osservazzjoni tal-fenomenu ta 'xrar tal-kalċju fil-membrana taċ-ċellula, monitoraġġ tal-kanal tal-joni.
Riċerka tal-mutur molekulari: muturi rotazzjonali, proteini ċitoskeletali, polimeri, proteini G, proteini taċ-ċirku, muturi nukleotidi.
Minbarra l-qasam tal-bijoloġija, għandu wkoll applikazzjonijiet tajbin fil-qasam tal-kimika għall-osservazzjoni ta 'strutturi molekulari kimiċi.
